动物性蛋白质饲料胃蛋白酶消化率的测定.docxVIP

-- ---- 动物性蛋白质饲料 胃蛋白酶消化率的测定 过滤法 参考标准： GB/T 17811-2008 一、适用范围 适用样品名称 不适用样品名称 原料 动物性蛋白质原料 植物性蛋白质原料 成品 动物性蛋白质饲料 植物性蛋白质或混合饲料 二、实验原理 已脱过脂的试样 , 用温热的胃蛋白酶溶液 ( 酶液浓度和用量与酶解试样质量恒定 ), 在恒温、持续不断地振摇或搅拌下消化 16 小时 , 过滤分离不溶性残渣 , 洗涤、干燥 , 测定残渣的粗蛋白质含量。同时测定空白和脱脂未酶解试样的粗蛋白质含量。 三、实验用品 1． 实验用试剂 试剂名称 规格/浓度 配制方法 备注 乙醚 AR 无需配制 在空气中会慢慢氧 化成过氧化物，过 氧化物不稳定，加 热易爆炸，应避光 保存。 丙酮 AR 无需配制 易燃、易挥发。 胃蛋白酶溶液 胃蛋白酶活性 1：10 将 6.1ml 浓盐酸稀释至 （1）此溶液临用 000 1000ml 水中（溶液 PH1～ 前配制。 20 IU/ml 2），水浴加热至 42℃～ （2）勿在加热板 45℃，加入 2g（精确至 上加热胃蛋 ±0.0002g ）活性为 1： 白酶溶液或 10 000 生化级胃蛋 白 配制时过热。 酶，并缓慢搅拌直至溶 解。 浓硫酸 AR， 98% 无需配制，直接使用 具强腐蚀性、强刺 激性，可致人体灼 伤。 混合催化剂 AR 称取 0.4g CuSO42 5H2O， 1 氢氧化钠 AR， 40%水溶液 硼酸 AR， 2%水溶液 混合指示剂 硫酸铵 AR 蔗糖 AR 盐酸标准溶液 AR 2． 实验用设备 仪器设备名称 高速万能粉碎机 分析筛 分析天平 冷冻水浴恒温振荡器 FOSS 手动索氏提取系统 消煮炉 凯式烧瓶 凯氏蒸馏装置 磨口三角瓶 布氏漏斗 真空泵 快速定量滤纸 容量瓶 烧杯 滴定管 锥形瓶  6gK2 SO4， 磨碎混匀 称取 40g 氢氧化钠用去 此溶液置于塑料桶 离子水配成 100ml 溶液。 中保存。 称取 2g 硼酸固体，加热 溶于水，配成 100ml 溶 液。 称取 0.1g 甲基红溶于 阴凉处保存 95%乙醇，配成 100ml 溶 有效期三个月 液； 称取 0.5g 溴甲酚绿溶于 95%乙醇，配成 100ml 溶 液； 两溶液等体积混合。 无需配制 使用前在 105℃干燥 箱中干燥至恒重 无需配制 糖类物质，不能在 105℃干燥箱中干 燥，使用时可不干 燥。 具体见附录 2 规格 FW80 孔径 0.84mm(20 目) 感量 0.0001g LSHZ-300 2055 可控温 420℃ 250ml 常量直接蒸馏式 带盖， 250 ml Φ80mm XZ-1 12.5cm 1L 100 ml ， 1L 白色、酸式， 25ml 250m1 2 玻璃棒 三、实验内容 序号 实验项目 样品制备 样品脱脂 胃蛋白酶 消化  操作内容 注意事项 选取有代表性的样品用四分法缩减 试样勿吸潮变质。 200g，粉碎后全部通过 20 目筛，置于密闭样品袋中，阴凉处保存，备用。 称取 4g 试样 于 滤纸筒中，用 FOSS 含脂肪小于 1%可不脱脂；含脂肪 1%～10%建议脱脂；含脂肪大于 手动索式提取系统按粗脂肪检测方 10%则应脱脂。 法进行，脱脂后的样品只需在室温 风干，去掉石油醚即可。 称取已脱脂风干后的试样 （ 1） 应确保磨口瓶中样品完 1.0000g( 精确至± 0.010g) 于 250 全被胃蛋白酶溶液浸湿。 （ 2） 同时做酶液空白测定（即 ml 干燥的带盖磨口瓶中 , 加 150 ml 不加试样，其它步骤一 新配制的并已预热至 42℃～ 45℃的 样） 胃蛋白酶溶液 , 盖紧瓶盖 , 将瓶夹于 恒温摇床上 , 于 45℃、 80 r/min 恒 消化残渣 的处理  定速度搅动 16 小时进行保温酶解 消化。 从搅动器上取下磨口瓶，呈 45°角 放置，让残渣沉淀 15min 以上，随 后在铺有滤纸的布氏漏斗上抽滤， 先用少量水将瓶盖上的残渣洗至滤 纸，再将磨口瓶保持沉淀时的角度 移至布氏漏斗上， 慢慢倾出内容物， 使之通过滤纸后形成连续的细流， 避免任何不必要的搅动。 当上层液体通过滤纸后，于瓶中加 15ml 丙酮，用拇指盖住瓶口剧烈振摇，放开。再用拇指堵住瓶口，在滤纸上方将瓶倒置振摇，放开拇指，丙酮和残渣流到滤纸上。再用  1） 先过上层清液，液体通过滤纸的速度应与倾入的速度相同。 2） 过滤过程要小心操作，保证残渣毫无损失。 磨口瓶内的残渣要全部冲洗至滤纸上。 3 一份 15ml 的丙酮进行洗涤， 照上法 振摇和倒出。检查瓶子，并用丙酮 再次洗涤。当全部液体通过滤纸后 , 用洗瓶以少量丙酮洗涤漏斗壁上残 渣两次 , 并抽干。从布氏漏