银杏叶标准提取物EGb761及银杏叶制剂的质量评价.doc

银杏叶标准提取物EGb761及银杏叶制剂的质量评价 71厂ff ? 综述? 银杏叶标准提取物EGb761~及银杏叶制剂的质量评价(续完) (广州市药品拴验所广州51o16o)五, 4银杏叶的标准 德国和法国主要厂家对EGb761~质量标准和检验 方法都不向外公开.近年来才公开了一部分(如上所 述),最近美国药典论坛公布了一个供征求意见的银杏 叶质量标准的草案l】引,内容有基源,性状,显散镜鉴别 和薄层色谱鉴别(黄酮甙及萜类内酯),检查(茎不得多 于3.0%,其他外来有机物不得多于20%,干燥失重 不得大于1l0%,总灰分不得大于11%;细菌数不得 超过10.000/g,霉菌不得超过100/g;不得有大肠杆菌 及抄门氏杆菌;重金属及农药残留限度待订),黄酮甙 含量测定不得少于0.8%(水解后HPLC测定).但在 这个草案中没有规定萜类内酯的含量.是一个不足之 处.因为总黄酮甙(水解后HPLC测定)达到指标不是 太难,但类内酯这类重要的也是银杏叶特有的活性 成分.在不同质量叶子中含量差异很大.所,原料银 音叶的质量标准应该有萜类内酯含量限度的要求. 5银杏叶主要活性成分的检验方法进展 5.1黄酮醇甙类 银杏叶提取物中已知的有30余种黄酮醇甙,包括 单糖甙,双糖甙,三糖甙及香豆酰基葡萄糖甙以及双黄 酮类=1992年Hasler等建立丁HPLCEGbR黄酮醇甙 指纹图谱t7,利用二级管阵列紫外分光光度检测,在 30min内可将33种黄酮醇甙分开.而Schwabe与 Beaufoulpsen将EGb0中黄酮醇甙的HFLC的指纹图 谱做为标准图谱,不同批状的产品均以指纹图谱做 为内控标准.我们曾用EGb0的HPLC指纹图谱鉴别 不同厂家的银杏叶提取物.发现Schwabe与Beaufour 1口sen两家的产品相当稳定,指纹图谱基本相符,其他 厂家的产品因叶子的质量和生产工艺不同,用指纹图 谱可以区别EGB7610指纹图谱的应用是一个样板, 说明植物药虽然是天然产品,不同个体的成分有差异, 但从原料到生产工艺经过研究使之标准化,可以得到 质量稳定的产品.指纹图谱则是很有教的鉴别手段. 它提供的信息比单一指标成分的测定所提供的信息要 更多,更有用:由于银杏叶中黄酮醇甙种类多.分离的 难度大,对照品易得到而且昂贵:但是所含的黄酮 醇甙水解后,只有3种黄酮醇甙元.即槲皮素,山奈酚 和少量的异鼠李素.可利用盐酸水解后,HPLC方 ? 116? .1 法测定甙元的方法进行定量测定.计算方法是将测定 的3种甙元的数据乘以校正系数2.5【lBl.这一系数是 报据银杏叶总黄酮甙中认为活性强的香豆酰基黄酮醇 甙的平均分子量760与甙元的分子量换算而来.这种 换算方法严格讲是有问题的,因为这是建立在假设银 杏叶中所有的黄酮醇甙分子量都是大约760的基础 上.实际上分子量760的香豆酰基黄酮醇甙只占银杏 叶总黄酮醇甙的一小部分.固此24%的总黄酮是算 出来的.换言之,总黄酮醇甙的真实含量并没有这样 高坤,国外学者对此也有异议.只是沿用已九.已被 大家接受.但这种计算方法不可盲从,尤其分子量相 差较大的组分.人参皂甙的含量测定过去文献也有类 似的换算方法,但由于人参皂甙的分子量相互差别不 大,数据可能比较接近于真实而已.总黄酮醇甙的含 量测定方法也有报道用薄层色谱扫描法n,在规范化 的操作条件下,其准确度及精密度应该可以接受.分析 成本也较低廉.无论采用何种分析手段,样品的水解 条件(盐酸的浓度与加热时间等)是很关键的步骤,不 同实验室的结果重现性不好.与此有关. 银杏叶提取物供试品溶液的制备比较容易,但银 杏叶的供试品溶液制备固大量干扰成分的存在而增加 了困难,通常用液液萃取或固液萃取,近年来有』,用超 临界二氧化碳(10%甲醇改眭)萃取【: 52萜类内酯成分 银杏内酯(ginkgolide)A,B.C,J属于二萜类内酯. 白果内酯(bilohalide)属于倍半萜内酯.均含有3个五元 内酯环和1个特丁基.白果内酯的结构不太稳定,在 ]}:溶液中容易分解,加碱开环后难以再环合,这是 在不同产品中含量不稳定的原因.关于测定方法.早 期LobsteinGuth等(1983)及Wagner等(1989)分别 曾试图用HPLC或TLC解决萜类内酯的检验问题,但 由于样品处理过分复杂及紫外分类检测带来的干扰而 失败.1988年后逐渐有』,改用差示折光检测26解 决了紫外难以检测的问题.1991年T.ⅥmBeek做了 方法学验证,并将供试品溶液经聚酰胺小柱及c小柱 串用净化[】,形成了目前最常用的定量测定方法在 此期间,也有其他方法的探索,如HPLC~MS,HPLC- ELSD[. 样品经硅烷化后GC-FID[～.GC—MS[30]. 中国中药杂志1999年第24卷第2期