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* 2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体 一、动物细胞融合 (细胞杂交) 1、过程: 一、动物细胞融合(细胞杂交) 2、概念: 指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 3、结果: 形成单核的杂交细胞 4、原理: 细胞膜的流动性 5、诱导方式 物理法:离心、振动、电激 化学法:聚乙二醇(PEG) 生物法:灭活的病毒 动物细胞融合过程: 动物细胞A 动物细胞B 诱导,融合 筛选杂交细胞AB 有丝分裂 (膜融合、质融合、核融合) 注意:动物细胞的融合也需要把多个两种细胞放在一起,让它们随机融合后,再从中筛选杂交细胞 7、意义:突破了有性杂交方法的局限,使远缘杂交 (种间、属间、科间、动植物之间)成为可能。 8、应用:成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段 特别是利用细胞融合技术而发展起来的杂交瘤技术,为制造单克隆抗体开辟了新途径。 1、传统的抗体生产办法及缺陷是什么? 2、抗体由什么细胞产生? B淋巴细胞 每个B细胞只分泌一种特异性抗体 要想获得大量的单一抗体,必须克隆单一的B淋巴细胞,形成细胞群 设计方案: 一种B淋巴细胞--只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞--能在体外大量增殖 杂交细胞 二.单克隆抗体的制备 1、注射抗原的目的是什么 2、诱导其融合的方法有哪些? 3、融合后培养液中有几种细胞 4、第一次筛选的方法和目的 5、第二次筛选的方法和目的 6、杂交瘤细胞获得单一抗的方法 1、原理:杂交瘤细胞具有两个亲本的特性,即能迅速大量增殖,又能产生专一的抗体。 2、过程 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 诱导融合 B-B细胞 B-瘤细胞 瘤-瘤细胞 选择培养 杂交瘤细胞( B-瘤细胞) 克隆化培养 专一抗体检测 能产生特异性抗体的杂交瘤细胞 体外培养 小鼠腹腔内增殖 单克隆抗体 3.单克隆抗体的应用: 单克隆抗体的优点:特异性强、灵敏度高、产量大 ①作为诊断试剂:准确识别各种抗原物质,并与特异性结合 优点:准确、高效、简易、快速 ②用于 运载药物:制成“生物导弹” 治疗疾病:主要用于癌症治疗 既不损伤正常细胞,又减少了用药剂量。 除通过杂交瘤细胞产生单克隆抗体外,还有什么方法? *
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