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石河子大学实验课程教学大纲 生命科学学院 组织培养实验室 撰写人签名:陈 芳 课程名称：植物组织培养技术 英文名称：Plant Tissue Culture Technology 课程总学时 36学时　实验总学时　20学时　开设实验项目数 5 个 本大纲属 1.统编 2.自编 3.借用 实验教材或指导书;1.统编 2.自编 实验者类别: 1.本科 2.专科 3.研究生 4.进修生 5.其它 课程类型; 1.独立设课 2.非独立设课 实验考试考核方式：操作 实验成绩占课程成绩比例：50% 面向专业; 生物科学、生物技术 开出实验项目名称、实验类型及学时 1.植物组织培养实验室的基本设备和一般技术（综合性） 4学时 2.植物组织培养培养基的制备（综合性） 　　 4学时 3.外植体无菌系的建立（综合性） 　　　　　 4学时 4.植物材料初代培养与继代培养及培养物的观察与统计 （综合性） 　　　　　　　　　　　　　　　　 4学时 5.试管苗的生根，移栽及苗期管理（综合性） 　 4学时 一、组培实验室的设置 1.1 基本实验室 包括准备室、接种室和培养室，是组织培养实验所必须具备的基本条件。 1.1.1 准备室 其功能是进行一切与实验有关的准备工作。 主要包括器具的洗涤、干燥和保存；药品的称量、溶解、配制；培养基 的分装、包扎和灭菌；植物材料的预处理等。 1.1.2 接种室 其功能是进行材料的离体无菌操作。 主要包括植物材料的接种、培养物的转移、试管苗的继代等。 1.1.3 培养室 其功能是对离体材料进行控制条件下的培养。 换句话就是人工条件下培养接种物及试管苗的场所. 1.2.2 生化分析实验室 在以培养细胞产物为主要目的的实验室中，应建立相应的分析化 验实验室，以便于对培养物的有效成分随时进行取样检查。对于一些 大型的次生产物生产实验室，还应建立有效物质分离实验室。因此， 生化分析实验室的规模和性质需根据整体研究或生产的需要而定。 1.3 实验室的布局 植物组织培养实验室的布局是非常重要的，布局是否合理不仅影响到是否 经济，更重要的是会影响到是否能满足实验要求。实验室布局应在实验室建筑 设计时确定，其基本要求是：便于隔离，便于操作，便于灭菌和便于观察。 为了满足这几个要求，实验室的布局可根据组织培养实验的操作程序安排 实验室排列。接种室、培养室应放在与外界环境隔离的区域，使之能较长时间 保持无菌状态，从而免除频繁消毒的麻烦。灭菌室应与接种室相邻，以便于将 灭菌后的培养基及用品直接放置于接种室，尽可能免除再污染。其他实验室的 布局可根据条件，以方便实用为宜。 1.4 温室 试管苗移栽必须要有温室，如用钢架、玻璃架制造温室成本太 高，可用单坡塑料大棚代替，这种大棚在向阳面搭棚，其余三面打 墙，以防风保温。成本仅相当与钢架玻璃温室的1/8-1/5. 常规设备 2. 冰箱　各种维生素和激素类药品以及培养基母液均需低温保存，某些实验 还需对植物材料进行低温处理，在一般情况下均可利用普通冰箱完成。实验 一般配备冰箱1-2个。一个用于药品的贮藏，一个用于保存培养基母液以及用 作某些植物材料的低温处理。 本实验室配置的是：广东科龙　 SC-280WLP/H立式冷藏陈列柜 3. 酸度计 用于测定培养基以及其它溶液如酶制剂等的pH值，其精度要求因 实验需要而定，一般要求可测定pH范围在1-14之间，精度0.01即可。 一般用 小型酸度测定仪，即可在配制培养基时使用,也可测定培养过程中pH 值的变化. 若不做研究，仅用于生产，也可用pH值为4-7的精密试纸来代替。测定培养基 pH值时，应注意搅拌均匀后再测。　 常规设备 4.离心机 用于细胞、原生质体等活细胞分离，亦用于培养细胞的细胞器、 核酸以及蛋白质的分离提取。根据分离物质不同配置不同类型的离心机，如 用于细胞、原生质体等活细胞的分离，一般选用低速离心机，而核酸、蛋白 质的分离则要选择高速冷冻离心机。以规模化培养生产次生产物的实验室， 还应选择大型离心分离设备。 5.加热器 用于培养基的配制。研究性实验室一般选用带磁力搅拌器的加热 器，规模化大型实验室则应选用大功率加热和电动搅拌系统。有时，亦可用 电炉代替加热器，但必须选用适当功率和安全性能好的电炉。对于一些少量 培养基的配制也可用微波炉溶化蔗糖和琼脂，但分装前必须充分搅拌均匀。 6. 纯水器 离体培养应使用符合要求的的纯水或蒸馏水。用于一般培养，可使 用4级过滤的反渗透纯水器，也可使用蒸馏水器。对于一些精确培养试验，有 时需要使用双蒸水或超纯水，应配备更高一级的纯水设备。 7.分装设备 用于培