DN30-口腔咽拭子基因组DNA快速提取试剂盒.doc

PAGE 1 - ◆ TRIpure Reagent 抽提指南 ◆ 目录号 RP02 ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 ◆ TRIpure Reagent 抽提指南 ◆ 目录号 RP02 ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 ◆ TRIpure Reagent 抽提指南 ◆ 目录号 RP02 ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 ◆ 口腔/咽拭子基因组DNA快速提取试剂盒 ◆ 目录号 DN30 ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 1 - 0 - 口腔/咽拭子基因组DNA快速提取试剂盒 目录号：DN30 目录编号 包装单位 DN3001 50次 适用范围： 适合于从口腔/咽拭子中分离纯化基因组DNA。 试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成 保存 50次 裂解液ML 室温 20 ml 结合液CB 室温 20 ml 抑制物去除液IR 室温 25 ml 漂洗液WB 室温 15ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇 Carrier RNA -20℃ 310μg 洗脱缓冲液EB 室温 10 ml 蛋白酶K粉（可选） 20mg/ml -20℃ 20 mg 吸附柱AC和收集管 室温 50套 本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果 储存事项： 结合液CB或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。 为避免降低活性，方便运输，提供蛋白酶K为冻干粉状，收到后，可短暂离心后，加入1毫升灭菌水溶解。因为反复冻融可能会降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量分装冻存，－20℃保存。 Carrier RNA 收到时为冻干粉状，使用前按照注意事项4配制和储存。 避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。 产品介绍： 本试剂盒采用特制的进口DNA吸附柱和独特的缓冲液系统，特别适合于从口腔/咽拭子中分离纯化基因组DNA。各种来源样品裂解消化处理后DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜（特别配备了Carrier RNA可以从体系中轻松捕获微量核酸），再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净的基因组DNA从硅基质膜上洗脱。纯化后的DNA无杂质和PCR抑制剂，可直接适用于PCR分析。 产品特点： 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 节省时间，简捷，单个样品操作一般可在20分钟内完成。 配备了Carrier RNA 用于充分收集特别微量DNA。 多次柱漂洗确保高纯度，提取的DNA 纯度高，质量稳定可靠，可适用于各种常规操作，包括PCR、酶切、测序、Southern 杂交等。 注意事项： 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。 开始实验前将需要的水浴先预热到特定温度备用。 结合液CB 和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。 Carrier RNA ： Carrier RNA收到时为冻干状，使用时加入310μl RNase free 水充分溶解，配制成1μg/μl 溶液。Carrier RNA溶液应避免反复冻融，冻融次数不能超过3 次。所以建议在第一次使用时按自己每次的用量分装在RNase-free 的离心管中后置于－20℃储存。 Carrier RNA使用方法：如果起始处理量很少（口腔咽拭子上收集到的细胞很少），我们推荐使用Carrier RNA，如果预期有较大量DNA产量，用户可以根据需要选择是否加入Carrier RNA。使用时在每个样品提取所需结合液CB 中加入1μl Carrier RNA储存溶液， 将结合液CB 与Carrier RNA溶液充分颠倒混匀即可(结合液CB容易起泡沫,请勿使用涡旋振荡混匀)。也可根据样品数量，在总共需要的结合液CB中加入总共需要的Carrier RNA混匀备用。混合液在室温24小时内稳定。 Carrier RNA加入过多造成DNA洗脱液中Carrier RNA浓度过高，下游PCR反应可能受干扰，加入过少可能并不能帮助提高DNA产量和PCR敏感度，因此加入量应该在具体试验中调整以得到最佳效果。 操作步骤：（实验前请先阅读注意事项） 提示：第一次使用前请先在15ml漂洗液WB中加入60ml无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入! 取样：取一根医用消毒棉签（手不要碰触脱脂棉部位），伸进口腔，紧靠脸颊内侧来回刮拭20次