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一、基础知识: (一)微生物 朊病毒(蛋白质病毒) 细菌的营养类型 根据细菌所利用的能源和碳源的不同,将细菌分为两大营养类型。 自养菌: 异养菌: 腐生菌、寄生菌 基本结构: 特殊结构: 芽孢——休眠体,不是繁殖体 孢子——生殖细胞 5.细菌的群体特征—— 由单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度后,形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体叫菌落。 菌落是鉴定菌种的重 要依据。 菌落的大小、形状、边缘状况、质地、光泽、颜色及透明度等是微生物分类、鉴定的重要依据。 ·菌苔:固体培养基表面众多菌落连成一片,呈片状,这就是菌苔。 ·平板:即培养平板,指盛有固体培养基的平皿 四大类微生物区分要点 菌落形态: 1.若菌落表面湿润 薄而小——细菌 厚而大——酵母菌 2.若菌落表面干燥 密而小——放线菌 松而大——霉菌 原生生物界: 微生物的共同特点(小、多、快、强、广) (1)体积小,面积大 (细胞以微米、纳米来计算)? (2)吸收多,转化快 (3)生长旺,繁殖快 如大肠杆菌 (4)适应强,易变异 如感冒病毒 (5)分布广,种类多 选择培养基 9.倒平板: 待培养基冷却到50 ℃左右时,在酒精灯附近倒平板。(倒平板操作见课本)2d后观察平板,无杂菌污染才可用来接种. 10.无菌检查: 将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时,以检查灭菌是否彻底。 1.培养基灭菌后,需要冷却到50 ℃左右时,才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度? 答:可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶,感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时,就可以进行倒平板了。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰? 答:通过灼烧灭菌,防止瓶口的微生物污染培养基。 3.平板冷凝后,为什么要将平板倒置? 答:平板冷凝后,皿盖上会凝结水珠,凝固后的培养基表面的湿度也比较高,将平板倒置,既可以使培养基表面的水分更好地挥发,又可以防止皿盖上的水珠落入培养基,造成污染。 也可以避免空气中杂菌对培养基的污染. 4.在倒平板的过程中,如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位,这个平板还能用来培养微生物吗?为什么? 答:空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生,因此最好不要用这个平板培养微生物。 (二)纯化大肠杆菌 接种方法有: 平板划线法和稀释涂布平板法 微生物的接种技术: 平板划线的操作方法 交叉划线法 连续划线法 5 1 2 3 4 平板划线的操作 一旦划破,会造成划线不均匀,难以达到分离单菌落的目的; 二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落,菌落会沿着划破处生长,会形成一个条状的菌落。 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环?在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗?为什么? 答:操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物;每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后,接种环上残留的菌种,使下一次划线时,接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端,从而通过划线次数的增加,使每次划线时菌种的数目逐渐减少,以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环,能及时杀死接种环上残留的菌种,避免细菌污染环境和感染操作者。 2.在灼烧接种环之后,为什么要等其冷却后再进行划线? 答:以免接种环温度太高,杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时,为什么总是从上一次划线的末端开始划线? 答:划线后,线条末端细菌的数目比线条起始处要少,每次从上一次划线的末端开始,能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少,最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 稀释涂布平板法 把菌液进行一系列梯度稀释,然后将不同稀释度 的菌液分别涂布到固体培养基上进行培养。在 稀释度大的菌液里,就会出现单个菌体形成的 菌落 细菌:湿润,粘稠,易挑起 放线菌:干燥,多皱,难挑起,菌落较小,多有色素 酵母菌:湿润,粘稠,易挑起,表面光华, 比细菌的菌落大而厚. 霉菌:菌丝细长,菌落疏松,成绒毛状、蜘蛛 网状、棉絮状,无固定大小,多有光泽, 不易挑起。 不同微生物菌落的特点 同类微生物的不同物种,菌落的特点也不相同。 藻类、原生动物类、原生菌类 草履虫 微生物的种类 有细胞结构 没有细胞结构 原核生物 (原核细胞构成) 真核微生物 (真核细胞构成) 真菌 原生生物 病毒 (二)培养基 人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质。 按成分分 按功能分 按物理状态分 培养基类型
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