血液疾病流式细胞术分析.ppt

血液病的流式细胞术分析 流式细胞术在血液病中的应用： 急性白血病免疫分型 淋巴细胞增殖性疾病免疫分型 骨髓增生异常综合征辅助诊断 微小残留白血病 ZAP70、P糖蛋白等预后指标检测 PNH（CD55、CD59） 细胞周期分析 CD34+细胞绝对计数 标本种类 外周血 骨髓 胸腹水 脑脊液 淋巴结细针穿刺液 活检组织 标本要求 室温或2～4℃ 72h内 骨髓：急性白血病，MDS，MM 外周血：CD55、CD59，LGL 标本前处理： 离心收集细胞（胸腹水、脑脊液）或制备细胞 悬液（活检组织） 了解标本中细胞组成（瑞氏染色、台盼蓝染色） 细胞浓度调整 一般处理步骤 胞膜抗原：标记-溶血-洗涤 胞浆抗原：标记-溶血-固定/破膜-标记-洗涤 免疫球蛋白：溶血-洗涤-标记-洗涤 设门方案 SSC/FSC CD45 CD19、 CD20 CD3、CD5 抗体设置 髓系 一般标志：CD13、CD33、CD117、MPO 其他标记：CD14、CD64、CD4 CD71、Gly A CD61、CD41 CD36 其他非髓系标记：CD2、CD5、CD7、CD56、CD19 骨髓增生异常综合症（MDS） B淋巴细胞 κ、λ确定克隆性 阶段性B细胞标记物：CD5、CD10、CD20、CD22、CD23、FMC7 其他标记物：CD11c、CD25、CD103、CD38 T/NK细胞 抗原表达缺失和强度变化 T淋巴细胞：CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8 NK细胞：CD16、CD56 结果分析 分析的重点在于确定每一个细胞标记的存在与否以及表达的强弱（模式识别）。 每个抗体在阳性细胞上的表达百分率并不重要。 以残存正常细胞（如正常成熟淋巴细胞）作为分析参照物。 结合细胞形态可事半功倍。 原血细胞 结果报告 * * 华西医院临检血液室 蒋能刚 光散射特征与细胞形态的关系 正常骨髓 淋巴 单核 粒细胞 CD45 SSC 原始 嗜碱 嗜酸 Blast windows 主要表现为粒系及单核系抗原表达异常 正确的结果解释有赖于良好的质量控制和标本细胞活性 benign Malignant AML-M1 AML-M2 AML-M3 AML-M4/M5 AML-M6 非造血细胞 非特异性染色（死亡细胞） ALL 血小板附着于原始粒细胞所致CD61阳性拖尾 巨核细胞白血病 微小残留白血病： 灵敏度为1/1000～1/10000 以初诊时免疫表型作为设置抗体组合的依据 排除非特异性染色细胞和杂质的影响