高效液相色谱技术(ppt 21页).pptVIP

* 流动相的选择原则是： ①样品易溶，且溶解度尽可能大。 ②化学性质稳定，不损坏柱子。 ③不妨碍检测器检测，紫外波长处无吸收。 ④粘度低，流动性好。 ⑤易于从其中回收样品。 ⑥无毒或低毒，易于操作。 ⑦易于制成高纯度，即色谱纯。 ⑧废液易处理，不污染环境。 * 7.2 基本参数 1.??保留值 进样 ? ?t0 tR ⑴保留时间“ tR”：进样至出峰的时间。 ⑵死时间“ t0”：不被柱子吸附的惰性物质的出峰时间。 死时间“ t0”的测定通常是使用不被柱子保留而又有紫 外吸收的惰性物质，例如：正相色谱常用四氯化碳， 反相色谱常用甲醇、尿嘧啶、NaNO3等。 * ⑶容量因子“ k’ ”： 或： “ k’ ”是比“ tR”还常用的保留值，它与柱子的大小及流速无关，只与溶质在固定相和流动相的分配性质、柱温以及相空间比（即固定相和流动相之体企积比）有关。“ k’ ”又定义为在分配平衡时某溶质在两相中绝对量之比，消除了保留值的波动因素，而平衡常数“ K ”是平衡时物质在两相中的浓度比。 k’值的范围： 0.4＜k’＜20～30 k’＝2～5为佳，过大则耗时太长。 * ⑷保留体积：VR＝tR?FC ( FC --- 流动相的流速 mL/min ) VR 是在 tR 时间内流动相流过柱子的体积。 调整保留时间：tR’＝ tR－t0 调整保留体积：VR’＝ VR－VR0＝tR’ ?FC ⑸选择性指标“α’ ”和相对保留值“α” α’ 可以更直观和方便地反映色谱峰分离的好坏： 进样 tR(1) tR(2) 相对保留值α(分离因子)： ( α＞1.1为好 ) * 2.???柱效率： 定义： 理论塔板数 ： ( 每米柱 ) ?—标准偏差，曲线拐点处峰宽的 1/2h 2? 一半，即峰高0.607处峰宽的一半。 ? W1/2 为便于测量，改用半峰宽： 1/2h W1/2( 或2×△t1/2 ) Wb 最常用的计算式： 另一计算式： ( Wb不如W1/2容易测量，因而此式用的较少。) * 理论塔板高度： ( L — 柱长) 经验式： H＝2dP ( dP＝10μ H＝20μ N＝5万 ) ( dP＝5μ H＝10μ N＝10万 ) dP—柱填料的颗粒直径 柱效的测定和计算： 以反相柱为例，流动相用87％(V/V)的甲醇:水，样品用苯、联苯、萘等，加快记录仪的走纸速度，测出半峰宽W1/2，并由走纸速度换算为与 tR 相同的单位 “分” 或 “秒” ，代入公式，计算出柱效N。 提高柱效的方法： ①固定相填料要均一，颗粒细，装填均匀。 ②流动相粘度低。 ③低流