实验荧光显微镜的使用.ppt

反射荧光显微镜原理 汞 灯 激发滤色镜 分色镜 吸收滤色镜 物 镜 标 本 反射荧光显微镜的构造 吸收滤色镜 激发滤色镜 分色镜 汞灯 紫外线保护罩 孔径光栏（FS） 视场光栏（AS） 反射式荧光显微镜原理 落射光激发的荧光法是近代显微镜检术中新发展出来的一种强有力的反差增强法。 它将激发荧光用的光源改在物镜的上方，光由物镜上方经反光镜射入物镜去激发样品，从样品上被激发的荧光经物镜成像并穿透反光镜而由目镜观察。 如换用不同的激发滤片／双色束分离器／阻断滤片的组合插块，可满足不同荧光反应产物的需要。 此种荧光显微镜的优点是视野照明均匀,成像清晰,放大倍数愈大荧光愈强。 2．反射式荧光显微镜 透 射 式 落 射 式 四、荧光显微镜使用方法 1．打开灯源，超高压汞灯要预热几分钟才能达到最亮点。 2．透射式荧光显微镜需在灯源与聚光器之间装上所要求的激发滤片，在物镜的后面装上相应的阻断滤片。 落射式荧光显微镜需在光路的插槽中插入所要求的激发滤片／二向色镜／阻断滤片的插块。 3.用低倍镜观察，根据不同型号荧光显微镜的调节装置，调整光源中心,使其位于整个照明光斑中央。 4.放置标本片，调焦后即可观察。 使用中应注意： 未装滤光片不要用眼直接观察，以免引起眼损伤； 用油镜观察标本时，必须用无荧光的特殊油镜； 高压汞灯关闭后不能立即重新打开，需经5分钟后才能再启动，否则会不稳定，影响汞灯寿命。 四、荧光显微镜使用方法 荧光观察的基本调整步骤?　 　 　　 　调整汞灯象，让其聚焦对中心。调整步骤：　（1） 将调心工具旋在空出的物镜转换器孔上，并让其进入光路。　（2） 打开前光闸，让落射光进入光路。（注：调汞灯象中心时，一般采用B波段的滤光块）　（3） 通过调心工具的观察窗口，将汞灯象聚焦对中心　　a. 当泵灯象在投影平面的外部时，旋动位于灯室外部的横向和纵向的调中心旋钮将汞灯象（尚未聚焦）接近投影平面中心。　　b. 再旋动位于灯室外部的聚焦旋钮，使汞灯象聚焦在投影平面上。　　c. 再次旋动横向和纵向调中心旋钮，将汞灯象最终清晰地固定在中心。　（4）旋下调心工具，重新旋上物镜。　 　让标本进入光路，选择适当波段滤光块进入光路，并用10X物镜聚焦。　 　对目镜进行适度和瞳距调节。　 　视场光阑对中心。　 　转换所需倍率的物镜观察标本。 实验2荧光显微镜的使用 荧光显微镜的使用 实验二 实验目的 掌握荧光显微镜的结构、原理及其使用方法。 实验用品 荧光显微镜及荧光装置附件。人口腔上皮细胞装片，植物茎部组织装片。 实验原理 荧光显微镜是一种较为常用的光学显微镜。它是由光源、滤色镜系统和光学系统等主要部件组成。 其基本原理是利用一定波长的激发光对样品进行激发，使之产生一定波长的荧光，从而用于对样品结构或其组分进行定性、定位、定量观察检测。 透射荧光显微镜的构造 吸收滤色镜 暗场聚光镜 激发滤色镜 汞灯箱 透射荧光显微镜原理 目镜 吸收滤色镜 物镜 暗场聚光镜 激发滤色镜 汞灯 透射荧光显微镜原理 反射荧光显微镜原理 汞 灯 激发滤色镜 分色镜 吸收滤色镜 物 镜 标 本 实验原理 某些物质经波长较短的光照射后，分子被激活,吸收能量后呈激发态。 其能量部分转化为热能或用于光化学反应外，相当一部分则以波长较长的光能形式辐射出来，这种波长长于激发光的可见光称为荧光。 荧光显微镜是利用一定波长的光激发标本发射荧光，通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像。 什么是荧光 ? 物质中的电子吸收光的能量由低能状态转变为高能状态，再回到低能状态时释放出的光。 即：物质吸收短波光，发射出的长波光。 保持固有的荧光特性 荧光波长＞激发波长 荧光强度极小于激发光的强度 有不同程度的衰减 荧光强度取决于激发光强度、被检物浓度、荧光效率 荧光的性质 优点： 检出能力高 对细胞的刺激小 能进行多重染色 用途： 物体构造的观察 荧光的有无、色调比较进行物质判别 发荧光量的测定对物质定性、定量分析 荧光显微镜的优点和用途 荧光光源的作用 荧光光源不是作为照明的，而是作为荧光色素产生荧光的激发光。 实验原理 荧光有两种类型，一种是标本自身的原有荧光（自发荧光），另一种是利用荧光色素和细胞的特定部分反应所产生的荧光（次生荧光）。 自发荧光：在生物的某些组织中，经紫外线照射后能直接发射出荧光的称为自发荧光（或直接荧光）。如植物组织中的叶绿素，经紫外线照射后，即可发出红色荧光。 次生荧光：有些生物组织经紫外线照射后，并不能发出荧光，但是当它吸收荧光染料后也可以产生荧光，称为次生荧光（或间接荧光）。如吖啶橙，DAPI均可检测细胞内的核酸。 荧光显微镜的基