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SYBR? melts can reflect product size Herrmann et al. 2006 Melt comparison: LCGreen I vs. SYBR Green I Derivative melting curve plots of a molecular size ladder (inset) using either SYBR Green I (gray line) or LCGreen (black line) HRM workflow on the Rotor-Gene 6000 HRM Profile HRM on the Rotor-Gene 6000 高灵敏度的光学系统 精确的控温方式 高精度的温度分辨率（0.02 ℃ /S） 高强度的荧光采集速率（1000次/ ℃） 功能强大的分析软件 突变体筛选 SNP分析 基因型分析 DNA甲基化分析 微卫星分析 …………… Concentration Measurement DNA Concentration Measurement The Rotor-Gene is fully equipped to do DNA concentration measurement using fluorescent dyes Using a standard run protocol and integrated analysis software, the concentration of unknown samples is determined from a standard curve. Rotor-Gene 2000 2000 热力学系统 降温机制 光学激发和检测系统 影响荧光定量的因素 软件优势 软件分析功能强大，除了最基本的绝对定量、等位基因分析、双标准曲线法和Delta-Delta Ct法相对定量，还可以HRM进行SNP分析以及终点分析、散点分析、浓度分析等； 软件提供满足不同要求的实验结果报告，可以WORD、EXCEL、E-MAIL等方式保存，同时也打印报告文件。 5 Models to suit different needs and budgets: 谢谢！ Let Professional Serve Professional! 重复样品CT值差别大，扩增效率不一致——温度均一性问题 扩增低拷贝重复性差——温度均一性问题 准确性不佳，难以区别单倍差异拷贝数——温度均一性问题 需ROX内参，校正系统误差——光路系统问题，造成光谱重叠，导致检测不准确 √ 重复性 20?L反应体系，18次重复 15?L反应体系，18次重复 10?L反应体系，18次重复 5?L反应体系，18次重复 √ 准确性 16组2倍稀释样品，每次两个重复 1. 2-Plex Green/Yellow 2. 2-Plex HRM Green/Yellow + High Resolution Melt channel 3. 5-Plex Green/Yellow/Orange/Red/Crimson 4. 5-Plex HRM Green/Yellow/Orange/Red/Crimson + High Resolution Melt channel 5. 6-Plex Blue/Green/Yellow/Orange/Red/Crimson Channel Excite/Detect (nm) Example fluorophores detected Blue 365/470 BiosearchBlue?, Marina Blue?, Bothell Blue?, Alexa Fluor? 350 Green 470/510 FAM?, SYBR? Green 1, Fluorescein, EvaGreen?, Alexa Fluor? 488 Yellow 530/555 JOE?, VIC?, HEX?, TET?, Yakima Yellow?, Cal Flour? Gold 540 Orange 585/610 ROX?, Cy3.5?, Redmond Red?, Alexa Fluor? 568 Red 625/660 Cy5?, Quasar670?, LCRed640?, Texas Red?, CAL Fluor? Red Crimson 670/710 Quasar705?, LCRed705?, Alexa Fluor? 680 HRM 460/510 SYTO?9, LC Green, LC Green?Plus+, EvaGreen? UV IR A DNA
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