染色体8p上肝癌转移相关基因的筛选与初步验证.pdfVIP

之一，全球年新发病55．1万例，居恶性肿瘤发病率第5位：年死亡约52．9万例，居 癌症死因第3位。其中83％的病例发生在发展中国家，而中国发病人数就占总病 例数的54％Ul。以手术为主的综合治疗，可明显延长病人的生存，部分病人甚 至可获得长期生存。但转移复发已成为进一步提高肝癌治疗效果、延长病人生存 的最主要障碍。肝癌根治性切除后5年转移复发率高达61．5％，即使是小肝癌也 达43．5％吼其主要原因之一是肿瘤血管侵犯导致肝内播散I”J。 传统的肝癌预后指标多为临床病理学指标，如肿瘤大小、数目、包膜、分化、 脉管侵犯、炎细胞浸润以及肿瘤的临床分期等，这些指标也均可在一定程度上反 映肝癌侵袭性的高低16J。但在临床上经常发现一些分化程度较高的小肝癌表现出 很高的侵袭性，伴随出现脉管内癌栓或肝内多发播散病灶；而有些体积大、多中 心发生、无完整包膜、低分化的肝癌，却无转移。这些表明临床病理学指标并不 能完全准确的反映肝癌的侵袭性；而且，不能从本质上反映肿瘤侵袭转移机制与 本质。探索肝癌转移复发的分子机制，有助于其早期预测与及时防治：探明肝癌 转移复发机制，就成为进一步提高肝癌临床治疗效果的基础和关键。有关肝癌侵 袭转移的研究也成为当前肿瘤研究的热点之一。 近年来，分子标志物在恶性肿瘤的诊断、侵袭与预后的预测等方面的应用日 益受到重视；研究发现许多分子标志物与肝癌的侵袭性具有相关性，范围涉及肿 瘤相关抗原、细胞粘附与细胞外基质降解相关的分子、肿瘤血管生成相关的分子 等各个方面I”。包括肝癌在内的恶性肿瘤的发生发展是一个多因素诱导、多基因 参与、多阶段演进的过程，涉及促癌基因的激活和抑制基因的失活，肿瘤转移相 关基因的功能异常，因而对相关基因的研究是了解这一生物学过程的全貌的基 础。 8号染色体短臂(8p)的改变在多种类型的肿瘤中被发现【9。111。我所以往用比较 基因组杂交(CGH：eomparativegenomic 失与肝癌转移有关【l“。对HCC转移细胞株及不同转移潜能的细胞动物模型的 研究也发现相似的结果【l”。并且在后来的全基因组微卫星分析进一步证实【141。 这些为进～步筛选肝癌转移相关基因提供了靶点【12；14，“I。 近年兴起的基因芯片技术能在全基因组范围内寻找与肿瘤发生、发展相关的 基因，该技术具有快速、平行、高效、高通量地分析生物信息的特点，这一巨大 优势是其他分子生物学技术所无法比拟的。本课题运用定制的代表染色体8P上 322个基因的寡核苷酸芯片，检测不同转移潜能的肝癌组织和细胞株，筛选出位 于染色体8P的与抑制肝癌转移相关的基因；并用RT-PCR和Real．timePCR对筛 选出的基因进行了初步验证。 第一部分利用寡核苷酸芯片筛选染色体8p上肝癌转移相关基因 材料与方法 1．临床标本的准备 1．1临床标本入选标准 正常对照标本入选标准包括：有乙肝病史，既往无肿瘤等相关疾病史，术后 病理证实为肝海绵状血管瘤。 无转移肝癌标本入选标准包括：有乙肝病史，初次诊断为肝癌，无术前治疗， 肿瘤单个，术中未发现转移，行根治性切除术，术后病理证实为HCC，无镜下癌 栓，术后6个月以上无复发转移。 有转移肝癌标本入选标准包括：有乙肝病史，初次诊断为肝癌，无术前治 疗，术前／术中发现转移灶，术后肿瘤及转移灶均经病理证实为HCC。 1．2临床标本具体描述 10例正常标本均来自术后病理证实为肝海绵状血管瘤的患者，取血管瘤旁正 常肝脏组织。lO位患者年龄34—59岁，平均46．5岁，均乙肝阳性，肿瘤大小5 —17 cm，平均9．65cm。将10例正常标本混合后形成一个标本池作为后继实验 中的对照品。具体资料见下表： 表1．1 10例正常肝组织标本的病人临床病理资料 平均7．69cm；11例患者AFP20p．g／L。具体资料见下表： 表1．2 20例无转移HCC标本的病人临床与病理资料 6 平均7．925cm：16例患者AFP20}jtg／L。具体资料见下表： 表1．3 20例有转移HCC标本的病人临床与病理资料 1．3临床标本比对方法 ． 有转移肿瘤的原发瘤(20例)与正常肝组织RNA混台后形成的对照标本池 比对，共20张芯片 ． 有转移肿瘤的转移灶(20例)与『F常肝组织RNA混合后形成的对照标本池 比对，芪20张