课件：实验三血清中总胆固醇的测定.pptVIP

可编辑 可编辑 血清中总胆固醇的测定 实验三 （胆固醇氧化酶法） 一、实验目的 学习胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇的原理。 掌握血清总胆固醇的测定方法及操作技术。 （1） （3）H2O2+4-氨基安替吡啉（4-AAP）＋苯酚 游离胆固醇＋FAA 胆固醇酯酶 H2O ＋红色醌类物质 过氧化物酶 （POD） 510nm 光吸收法测定 相对血清总胆固醇浓度 二、实验原理 血清总胆固醇 游离胆固醇 胆固醇酯 胆固醇氧化酶 胆甾烯酮+H2O2 （2）游离胆固醇 三、实验器材 材料：人血清 试剂：总胆固醇测定试剂盒 用具：分光光度计，微量移液枪，试管，试管架，恒温水浴锅 （1）取3支试管，按下表加入试剂: 试剂 试剂空白管 标准管 样品管1 样品管2 样品管3 工作试剂(mL) 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 标准液(uL) – 10.0 – – – 血清样品(uL) – – 10.0 10.0 10.0 四、实验步骤 充分混匀，37℃ 水浴中保温15min； 冷却至室温后，510nm处比色 比色方法：以空白管调零，读取标准管及样品管光密度值。 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 （2）计算： 依据朗伯-比尔定律： A=KLC 标准管胆固醇浓度：5.17mmol/L 样品管胆固醇浓度(mmol/L) ＝ 样品管光密度值 标准管光密度值 ×5.17 C样= A样 A标 × C标 参考值 胆固醇 血清参考值：3.0 ~ 5.20mmol/L 危险阈值：5.20 ~ 6.20mmol/L 高胆固醇血症： 6.20mmol/L 正确使用比色器皿：手拿比色皿的毛面；比色液应占比色皿的2/3。 测定胆固醇所用的试剂应防止被葡萄糖和甘油三酯污染。 微量移液枪的正确使用 注意事项 思考题 1、简述胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇的基本原理？ 2、分析影响实验结果的因素有哪些？如何克服？ THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 方法评价： 此方法特异性高、准确、简便，还可用于自动分析仪 可编辑 可编辑 方法评价： 此方法特异性高、准确、简便，还可用于自动分析仪