实验11 植物的组织培养.ppt

实验11 植物的组织培养 一、实验目的 1.进行菊花的组织培养。 2.尝试植物激素的应用。 1、概念：组织培养就是取一部分植物组织，如叶、芽、茎、根、花瓣或花粉等，在无菌条件下接种在三角瓶中的琼脂培养基上，给予一定的温度和光照，使之产生愈伤组织，或进而生根发芽。 二、组织培养基础知识 细胞分裂素/生长素： 浓度比例高：促芽生成； 浓度比例低：促根生成； （1） MS培养基： 2、培养基 常用植物激素 生长素——生长素类 天然的：吲哚乙酸（IAA），4-氯吲哚乙酸等 人工合成的生长素类似物： 吲哚丙酸（IPA），吲哚丁酸（IBA）， α-萘乙酸（NAA），2.4-D 天然生长素类激素： 1、含量低获取难 2、植物体内含降解此类激素的酶，缩短作用时间，降低作用效果。 故一般采用人工合成的类似生长素 萘乙酸(NAA)需用少量0.1mol/LNaOH溶液溶解 细胞分裂素类 天然的：玉米素等 人工合成的： 激动素（KT），苄基腺嘌呤（BA） 苄基腺嘌呤（BA） 需用少量0.1mol/L HCl溶液溶解 “发芽培养基”、“生根培养基” 是在基础培养基中加入不同剂量和配比的植物激素后的培养基。 （2）发芽培养基： 3000mLMS培养基 含1.5mgBA（苄基腺嘌呤）溶液（相对较多） 含0.02mgNAA（萘乙酸）溶液（相对较少） 30g蔗糖 40g琼脂 蒸馏水定容至4000mL （3）生根培养基： 1000mLMS培养基 含0.38mgNAA（萘乙酸）的溶液 30g蔗糖 20g琼脂 蒸馏水定容至2000mL 注： 当生长素和细胞分裂素两者摩尔浓度大致相等时，愈伤组织继续生长不分化。 3、植 物 组 织 培 养的流程 叶肉组织 愈伤组织 新植株 离体的植物器 官、组织或细胞 脱分化 愈伤组织 再分化 根、芽 植物体 不需要光照 需要光照 三、实验步骤： 1.取外植体 超净台上将无菌幼苗切段,每段至少1张叶片 2.生芽培养 生芽培养基中，放入2-3段切段(茎部插入培养基,盖上封口膜。日光灯下保持18-25℃的温度培养，每天光照不少于14.5h。 3.生根培养 2-3周后，将丛状苗在无菌条件下转入生根培养基中，在上述条件下继续培养。 4.适应锻炼 将苗转移至草炭土或蛭石中,用玻璃罩或塑料布保持80％以上的湿度,2-3天后打开减低湿度进行锻炼,直到将罩全部打开处于自然湿度下为止。 5.定植 将苗转移 到土中培养 草炭土 蛭石 自然生长的茎进行组织培养方法: 70％乙醇中浸泡10分钟 5％次氯酸钠溶液中浸泡5min 5％次氯酸钠溶液中浸泡5min 超净台上用无菌水清洗 将茎移至生芽培养基中 课后题: 1.不同植物、不同组织的生根和生芽是否都可使用与本实验相同的生长素和细胞分裂素浓度？ 2.本实验用人工合成的激素，而不用植物中存在的天然激素，为什么？ 不可相同 天然激素都有相应的使之分解的酶，所以使用时间短，而人工合成的，没有分解酶，作用时间长，效果显著。 3.如果在自然界取植物样本进行组织培养,你认为应采取什么措施保证样本不被污染? （1）操作环境清洁 （2）植物样本的洁净 （3）操作敏捷迅速