DNA重组技术的基本工具实际应用.pptVIP

(1)一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有________个游离的磷酸基团。 (2)若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越__________。 (3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma Ⅰ切割，原因是________________________________________________________________________。 (4)与只使用EcoRⅠ相比较，使用BamHⅠ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止______________________________________。 (5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入__________酶。 (6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了______________________________________。 (7)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在__________的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。 【尝试解答】　(1)0、2　(2)高　(3)SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因　(4)质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化　(5)DNA连接　(6)鉴别和筛选含有目的基因的细胞　(7)蔗糖为唯一含碳营养物质 【解析】　环状DNA分子中磷酸全部参与形成磷酸二酯键，被Sma Ⅰ限制酶切开后相当于一个正常的DNA分子，每个DNA分子单链各含有一个游离的磷酸基团；A—T碱基对有两个氢键，而G—C碱基对有三个氢键，G－C碱基对含量越多，热稳定性越高； 从图中读出：Sma I限制酶破坏目的基因和标记基因；用BamHI和Hind Ⅲ两种不同的限制酶处理，形成不同的黏性末端，能有效防止只用一种限制酶形成的相同的黏性末端的质粒或目的基因相互连接、环状化；将质粒与目的基因“缝合”应用DNA连接酶进行处理；标记基因的作用在于鉴别和筛选含有目的基因的细胞；大肠杆菌突变体丧失吸收蔗糖的能力，不能在只有蔗糖为碳源的选择培养基上存活，所以可以用该种选择培养基对导入的蔗糖转运蛋白基因是否表达进行初步检测。 突破易错疑点 易混淆的几种酶 自我挑战如图为DNA分子的某一片段，其中①②③分别表示某种酶的作用部位，则相应的酶依次是(　　) A．DNA连接酶、限制酶、解旋酶 B．限制酶、解旋酶、DNA连接酶 C．解旋酶、限制酶、DNA连接酶 D．限制酶、DNA连接酶、解旋酶 【尝试解答】　__C__ 山东水浒书业有限公司· 优化方案系列丛书 专题1 基因工程 基础自主梳理 高频考点突破 命题视角剖析 即时达标训练 山东水浒书业有限公司· 优化方案系列丛书 专题1 基因工程 基础自主梳理 高频考点突破 命题视角剖析 即时达标训练 返回 * 1．1　DNA重组技术的基本工具 1．2　基因工程的基本操作程序 高频考点突破 1．1　DNA重组技术的基本工具 基础自主梳理 命题视角剖析 即时达标训练 1．2　基因工程的基本操作程序 基础自主梳理 一、DNA重组技术的基本工具 1．限制性核酸内切酶——“分子手术刀” (1)主要来源：原核生物。 (2)特点：能够识别DNA特定的___________，切开两个核苷酸之间的______________。 (3)DNA末端：限制酶切割DNA产生的DNA末端有两种形式：____________和平末端。 核苷酸序列 磷酸二酯键 黏性末端 2．DNA连接酶——“分子缝合针” (1)作用：将双链___________ “缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的__________。 (2)种类 ①E·coli DNA连接酶：只能缝合DNA的黏性末端. ②T4DNA连接酶：既可缝合DNA的黏性末端，又可缝合双链DNA的_______。 3．基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” (1)载体的种类 ①质粒。 ②噬菌体的衍生物。 ③动植物病毒。 DNA片段 磷酸二酯键 平末端 (2)质粒载体的特点 ①能够在细胞内自我复制。 ②具有一个或多个_______________，便于供外源DNA片段插入其中。 ③具有特殊的遗传标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。 二、基因工程的基本操作程序 1．目的基因的获取 (1)目的基因：指编码蛋白质的___________。 (2)获取目的基因的方法 ①从基因文库中获取目的基因 限制酶切割位点 结构基因 受体菌 所有 c．目的基因的获取依据： (ⅰ)基因的核苷酸序列； (ⅱ)基因的功能； (ⅲ)基因在染色体上的位置； (ⅳ)基因的转录产物mRNA； (ⅴ)基因的翻译产物蛋白质。 ②利用PCR技术扩增目的基因