基因打靶专题讲座.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * Cre-ER融合基因转基因小鼠 制备另一种基因打靶小鼠 再用插入两个反向loxP序列之间的基因制备另一种基因打靶小鼠，并使该基因DNA序列与其上游的启动子方向相反，则该基因必须依赖Cre重组酶调转方向后方能表达。 用这两种转基因小鼠杂交，后代中阳性重组鼠则仅在特定组织细胞中表达Cre酶，而且可以用注入人雌激素控制表达的时间。 这样则可使目的基因仅在被诱导调转方向后表达，而且表达的时间也可人为控制，做到了转基因的时相可控性表达。 两种转基因小鼠杂交 人雌激素注射诱导Cre表达 小 结 利用“基因打耙”技术制备转基因小鼠,可以定点转入一个特定的外源基因，实现转基因的定点整合。在此基础上还可以实现转基因的组织特异性表达及时间可控性表达。 利用基因打靶技术还可以“敲除”一个特定的内源基因, 从而制备“基因敲除小鼠”。这样就为研究基因的功能建立了一个全新的实验技术。 利用这一技术制备的动物模型，还可以用来研究人类疾病的发生、发展规律以及治疗方法。 表1.用基因打靶法制备的一系列重要的基因敲除小鼠及表型[8]： 敲除基因 表现型 RAG-1和/或RAG-2 因无TcR基因重排而无T细胞 TcRβ 双阴性胸腺细胞聚集，双阳性胸腺细胞很少，TcRα正常重排 TcRα 有双阴和双阳T细胞而无单阳性T细胞 P56lck T细胞发育在早期双阳性成熟期受阻，无?δT细胞 CD3-ζ T细胞发育在早期双阳性成熟期受阻 CD45 T细胞发育在双阳性成熟期受阻 MHC-Ⅱ,不变链 无CD4+T细胞，CD4+CD8-/+很少，正常NK，1.1+CD4+,CD8+正常 CD4 CD8+数量和功能正常 MHC-Ⅰ，β－2微球蛋白 无CD8+ T细胞，CD4+T细胞正常 TAP1/TAP2 TcR-δ 无?δT细胞，对结核杆菌易感性增加 P59fyn T细胞发育正常，T细胞应答缺损 IgM穿膜区 晚期CD43+B聚集，无等位基因排斥 Λ5 CD43+细胞聚集，部分成熟B细胞出现延迟 IL－2 IgG1, IgG2a，IgG2b自身抗体增加 CD40L 高IgM,无生发中心，低IL－12和IFNγ，巨噬细胞活化受阻 CD28 IgG1，IgG2b减少 转基因动物的维持 Duke University Laboratory Animal Resources Center SPF环境 胚胎的冷冻保存 Laboratory animal resources of University of North Carolina at Chapel Hill 美国实验动物公司 The Jackson Laboratory Telephone+1.207.288.5845 Fax+1.207.288.6150 Mail: The Jackson LaboratoryCustomer Service610 Main StreetBar Harbor, Maine04609-1500 U.S.A. Online:JAX? Mice Online Order Request Form (secure interactive PDF) Email: orderquest@? 美国实验动物公司 ? Charles River Laboratories, Inc.251 Ballardvale StreetWilmington, MA 01887-1000For General Inquiries? P