课件：激素的放射免疫测定技术.pptxVIP

;激素在血液、尿液、其它体液中的浓度是激素合成、分泌和代谢的综合反映，检测激素浓度是研究内分泌的常规方法。;性类固醇激素在调节脊椎动物下丘脑 -垂体 -性腺轴的发育成熟及功能的维持方面起着重要作用,其许多生理功能都是通过经典的核受体介导的。;提取激素，然后利用激素结构中某些基团或化学试剂的特殊反应，根据反应的特点用比色、层析、电泳法检测激素含量。这种方法的灵敏度和特异性较低，测定步骤繁琐;酶联免疫吸附测定法(ELISA);磁酶免疫激素测定仪;放射免疫测定（RIA）;125I标记的RIA原理;、实验所需要的仪器和设备 γ免疫计数器，SN695B6型，计算机数据处理程序安装。 低速冷冻多管离心机，TDL-5000B型, 5000rpm，放射免疫测定专用； 高速冷冻离心机，TGL-16G型, 16000rpm，分离血清； 制冰机，FM70A型，制备碎冰； 低温冰箱，海尔，256L，－40℃，储存待测定??品； 电热恒温水箱，维持37℃反应水温； 吸引器，抽吸反应上清液； 漩涡混合器，XW-8A型，反应样品混合； 普通冰箱，储存试剂盒等物品；;现代γ免疫测定系统;低速冷冻多管离心机;二、实验所需要的器皿和物品 T试剂盒； 放射免疫离心管、试管架和上样架； 加样器（100-200μl，10-40μl、1000μl）、枪头（100-200μl、1000μl）、加样枪盒； 铅屏风，托盘天平； 其它物品：隔离服、一次性手套、口罩、卫生纸、报纸（吸收纸）等；;;125I标记物：含有125I标记的T和E2磷酸盐液体。;三、测定项目;四、实验方法改进 采用人类血浆睾酮的I125标记的RIA，并加以改进。 点的扩展：将标准曲线的最低浓度（10ng/dl）用0标准液稀释到1ng/dl。 半微量法（I125标记物、标准品浓度、第一和第二抗体加半量）测定，所得到的结果被2除。 ;五、测定方案 T测定方案 （半量法）;实验前进行充分的准备工作，除了检查仪器设备、物品外，根据样品量，准备相应的测定管，编号 实验前，将血清、试剂盒等放在室温下解冻和平衡。 按照样品管编号，将血浆样品加入到试管中，加样顺序按照实验方案进行。 制备标准曲线：按照改进的方法制备标准曲线，注意标准曲线点的扩展。;六、具体步骤;实验室所有人员??? 准时准点。 对自己负责，对大家负责。 样品拥有者必须在场。 每一具体事项都应落实到人，看着步骤进行操作，防止遗漏。;;放射性物质的危害 放射源发射出来射线具有一定能量，它可以破坏细胞组织，从而对人体造成伤害。当人受到大量射线照射时，会产生诸如头昏乏力、食欲减退、恶心、呕吐等症状，严重时会导致机体损伤；当人只受到少量射线照射，一般不会有不适症状发生，也不会伤害身体。; 时间防护;