GB/T 31792-2015向日葵茎溃疡病菌检疫鉴定方法.pdf

ICS 65.020.01 k__ 、 B 16 G邑 中华人民共和国国彖标准 GB/T 31792—2015 向日葵茎溃疡病菌检疫鉴定方法 Detection and identification of Diaporthe helianthi Muntanola-Cvetkovic Mihaljcevic et Petrov 2015-07-03 发布 2015-11-27 实施 GB/T 31792—2015 ■ i r ■ ■ i 刖 吕 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC 271)提出并归口。 本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中国合格评定国家认可中心、中华人民共和国新疆出 入境检验检疫局。 本标准主要起草人：吴品珊、杜洪忠、蔡露敏、张祥林、严进。 T GB/T 31792—2015 向日葵茎溃疡病菌检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了向日葵茎溃疡病菌的检疫鉴定方法。 本标准适用于向日葵植株和种子中向日葵茎溃疡病菌的检疫和鉴定。 2仪器和用具 2.1仪器 体视显微镜、生物显微镜、超净工作台、光照培养箱、电子天平(1/1 000 g) 、高压灭菌锅、冰箱、PCR 扩增仪、荧光PCR扩增仪、电泳仪、凝胶成像仪、高速冷冻离心机、恒温水浴锅。 2.2用具 烧杯、三角瓶、量筒、试管、培养皿、酒精灯、银子、剪刀、解剖刀、接种针、载玻片、盖玻片、塑料研杵、 移液器、移液器吸头、离心管、液氮罐、样品筛(10目， 01.7 mm)0 3试剂和培养基 3.1试剂 葡萄糖，链霉素，乳酸，琼脂,1.0%次氯酸钠(NaClO) 液氮,Tris-HCl,MgCl2, HC1,EDTA NaOH NaOAc KC1 Tris CT AB TAE 无水乙醇(Ethanol) 三氯甲烷(Chloroform) 异丙醇(Isopropanol) 异 戊醇(Isoamyl alcohol),SYBR Green I核酸染料 ，蛋白酶K,Taq DNA聚合酶， dNTP 通用引物TTS5 和ITS4 实时荧光PCR特异性引物DH-F.DH-R及探针DH-Pr0 3.2培养基 马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA) 链霉素马铃薯葡萄糖琼脂培养基(SPDA)0具体配方参见附 录Ao 4检疫鉴定方法 4.1症状检查 采集田间疑似症状的茎杆、病叶或葵盘，剪取病健交界处的组织材料备用 。病害典型的症状是茎杆 和叶柄处有淡褐色溃疡病斑，详见附录A病害症状描述。 在种子中挑选干瘪、变色、皱缩、残缺或霉变的种子 ，同时挑选其中夹带的向日葵残体，如叶柄、茎 杆、花盘碎片等。 4.2分离培养 将有疑似症状的叶片、叶柄、茎杆、花盘碎片等样品在病健交界处剪取5 mm 〜10 mm的小块，用 1 GB/T 31792—2015 1%次氯