GB/T 34738-2017蜜蜂囊状幼虫病荧光PCR检测方法.pdf

ICS 11.220 B 41 £3© 中华人民共和国国家标准 GB/T 34738—2017 蜜蜂囊状幼虫病荧光PCR检测方法 Method of the real-time PCR for the detection of honey bees sacbrood disease 2017-11-01 发布 2018-05-01 实施 发布 GB/T 34738—2017 ■ r ■ —— 刖 弓 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC 181)归口。 本标准起草单位：中华人民共和国吉林出入境检验检疫局、吉林大学、中华人民共和国福建出入境 检验检疫局。 本标准起草人 侏战旳、冯新、孟日增、刘金华、魏春艳、牟峻、王振国、郑腾、孟庆峰、蔡阳 、肖成蕊、 王伟利。 T GB/T 34738—2017 蜜蜂囊状幼虫病荧光PCR检测方法 1范围 本标准规定了蜜蜂囊状幼虫病荧光PCR检测方法。 本标准适用于蜜蜂及其幼虫中囊状幼虫病的检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。凡是注日期的引用文件 ，仅注日期的版本适用于本文 件 。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本 （包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 18088出入境动物检疫采样 3试剂和材料 除非另有规定，仅使用分析纯试剂 。所有试剂均用无RNA酶污染的容器 （用焦碳酸二乙酯水处理 后高压灭菌）分装。 3.1 水,GB/T 6682,三级。 3.2蜜蜂裳状幼虫病毒。 3.3 引物和探针，上游引物 F1（1O pmol/ML）：5?-AAG TTG GAG GCG CGY ATT TG-3\下游引物 RK1O pmol/pcL） ：5-CAA ATG TCT TCT TAG DAG AAG YAA GGA TTG3,探针 Pl（5 pmol/yL）： 5?-FAM-CGG AGT GGA AAG AT-TAMRA-3? 0 3.4磷酸盐缓冲盐水，配制方法见A.l。 3.5总RNA抽提试剂。 3.6氯仿。 3.7异丙醇。 3.8 75% 乙醇。 注 ：用新开启的无水乙醇和焦碳酸二乙酯水配制。 3.9焦碳酸二乙酯处理的水。 3.10反转录酶。 3.11 RNA 酶抑制剂 （40 U/mL） 0 3.12 5X反转录酶缓冲液。 3.13 10XPCR反应缓冲液 （含镁离子）。 3.14 DNA 聚合酶（5 U/ L）o 3.15三磷酸脱氧核糖核昔酸（dNPTs每种浓度均为10 mmol/L）o 4器材 4.1荧光定量PCR扩增仪。 1 GB/T 34738—2017 4.2 台式冷冻高速离心机（离心速度12 000 r/min以上）。 4.3 微量可调移液器 （100 〜1 000 卩L 、20 yL 〜200 卩L 、2