GB/T 22332-2008鸭病毒性肠炎诊断技术.pdf

ICS 11.220 B 41 中华人民共和国国家标准 GB/T 22332—2008 鸭病毒性肠炎诊断技术 Diagnostic techniques for duck virus enteritis 2008-08-22 发布 2008-12-01 实施 发布 GB/T 22332—2008 刖 本标准部分技术采用 （）IE 《陆生动物诊断试验和疫苗手册M2004）推荐的试验方法，并把具体操作 程序予以细化。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位:华南农业大学、中华人民共和国广东出入境检验检疫局。 本标准主要起草人:郭霄峰、廖明、洪洁心。 T GB/T 22332—2008 鸭病毒性肠炎诊断技术 1范围 本标准规定了鸭病毒性肠炎病毒(DVEV)分离和鉴定及聚合酶链式反应(PCR)试验的诊断技术 要求。 本标准适用于鸭病毒性肠炎的诊断。 2临床症状和病理变化 家养的鸭和雏鸭从7日龄至成年均可感染发病。在易感鸭群，初始症状通常为突发持续性高死亡 现象，产蛋量明显下降 。由于感染禽的品种、年龄、性别以及病毒毒力的不同 ，暴发鸭病毒性肠炎 (DVE)后临床症状、剖检病变有很大的差异 。种鸭临床症状为流泪、怕光、烦渴、缺乏食欲、共济失调、 水样腹泻和流鼻液 。通常病鸭羽毛蓬乱，肛门粘有污物 。病鸭借助翅膀支撑方能保持平衡，整个外观虚 弱、精神沉郁 。但2周〜7周龄鸭中损失比成鸭低，其症状为脱水、体重下降 ，喙呈蓝色，肛门染有血迹。 剖检时发现，死亡的鸭并不消瘦 。性成熟的公鸭的阴茎可能脱垂 。性成熟母禽的卵巢滤泡出血。 特征性大体病变以血管受损，带有组织出血和体腔游离血液，消化道粘膜表面有环状出血和白喉样损 坏，淋巴样器官受损，实质器官呈退行性病变为特征 。白色北京鸭的特征性病变是血管及内脏器官损 伤，消化道上皮细胞出现嗜酸性核内包涵体和胞浆内包涵体。 3病毒分离 3. 1材料准备 3.1.1病料的采集：一般应在感染初期或发病急性期从濒死期禽或活禽采取 。濒死期禽采集肝、脾、脑 等组织样品 。活禽用灭菌的棉拭子涂抹泄殖腔 。带有分泌物的棉拭子放入每毫升含有1 000 IU青霉 素,1 000陆链霉素,pH7. 2〜7. 6的磷酸盐缓冲液(PBS) 中 。送检病料应置于50%的甘油生理盐 水中。 3. 1.2病料的保存：采集的样品若在48 h内处理，可于4 °C保存；否则应放一20 C以下保存(一70 C 贮存最好)。 3. 1.3病料的处理:将棉拭子充分捻动、拧干后除去拭子 。样品液经3 000 r/min 4 C离心30 min,取 上清液作为接种材料 。组织样品先用pH7. 2-7. 6的PBS制成5倍〜10倍乳剂，3 000 r/min 4 C离心 30 min,取上清液作为接种材料 。为防止细菌污染，可在样品液中加入青霉素(1 000lU/mL),链霉素 (1 000 pig/inL),卡那霉索 (1 000 ptg/mL) ,37 °C温箱中作用30 mino进行无菌检验。 3. 1.4鸭胚：10 0~11日龄的非DVE疫苗免疫鸭胚。 3.2实验操作 3.2.1胚胎接种：取经处理并且无菌检验合格的样品，以0.2 mL/胚的量经绒毛尿囊膜接种10日〜 11日龄的非DVE疫苗免疫的鸭胚，每个样品接种4个〜5个胚 ，于38 C〜38. 5 C恒温箱中孵育。