毕业论文--H-FABP基因克隆、分子特征及潜在肌肉生长发育功能MicroRNA鉴定.doc

不同品种肉牛H-FABP基因3‘UTR扩增及潜在肌肉生长发育microRNA甄选 摘要：根据GeneBank中心脏型脂肪酸结合蛋白（H-FABP)基因序列（NC-007300），设计并合成了2对引物，以6个品种牛肌肉组织DNA为模板，采用PCR技术用第一对引物扩增牛的H-FABP的3′-UTR基因全长858bp，再用第二对引物根据巢式PCR进行扩增基因全长261bp，并克隆、测序，最后进行mircoRNA预测、分析。这6个品种牛的H-FABP基因的成功克隆，为进一步研究牛肌内组织沉积研究奠定了基础。 关键词：心脏型脂肪酸结合蛋白基因；SNP；mircoRNA； Cloning and Molecular Characteristics of H-FABP Gene in six kind of Cattle with Identification of Potential Functional MicroRNA for Muscle Growth DU Xin, FANG Xue-song, Zhang Li-jun, BAI Wen-lin, WANG Zhe-ying?, LUO Guangbin? (College of animal husbandry and veterinary medicine, Shenyang Agriculture University,Shenyang,Liaoning, 110866,China) Abstract: Two pair of primers were designed and synthesized according to the bovine interferon batal (H-FABP) gene nucleic acid sequence (NC-007300) publishied in GenBank. H-FABP gene of the six kind bovine was amplified by PCR from genome DNA extracted from muscle of the bovine, first, we use the first pair of primers to amplificate the 3 UTR of H-FABP, the total long is 85bbp, then we use the second pair of primers to amplificate the 3 UTR of H-FABP further, then cloned and sequenced, predicted and analized ultimatelly. This study set a basis for the future study about deposition of beef intramuscular. Key words: the gene of H-FABP; sequence analysis; intramuscular of bovine 牛肉具有高蛋白、低脂肪、低胆固醇等特点，营养丰富，一直是世界肉业发达国家肉类消费的首选，而我国的牛肉消费量也在逐年上升，影响牛肉品质的因素众多，脂肪是肉品质的一个重要组成部分并且影响动物的产量[1,2]。脂肪的生成是一个复杂的过程，有900多个数量性状的候选基因对脂肪沉积进行调控[3]。国内外对其进行了广泛而深入的研究。其中H-FABP就是控制肌内脂肪的一个基因。 心脏型脂肪酸结合蛋白(Heart Fatty Acid-Binding Protein, H-FABP)是1972年发现的，又被称为FABP3，分子量为14-15kDa。H-FABP是FABPs家族中分布最多的一种。由于H-FABP基因管理脂质和脂肪酸的转运和沉积，因此H-FABP与脂肪特性相关。除此之外，H-FABP基因与IMF含量的遗传变异相关。H-FABP基因主要是参与细胞内的脂肪酸运输，将脂肪酸从细胞膜上运到脂肪酸氧化和三酰甘油及磷脂的合成位置。H-FABP在细胞内与脂肪酸结合，使细胞内外保持一定的浓度差，促进细胞摄取脂肪酸[4]。 microRNAs与脂代谢密切相关，越来越多的研究表明，miRNAs 可以通过与脂类代谢相关基因靶位点结合在转录后水平参与调节脂肪酸和胆固醇等多个层面的脂类代谢。目前,关于肌肉发育的机制还不是很清楚,但是在肌细胞的增殖、分化过程中许多调节因子都发挥着重要作用, microRNAs也在其中发挥重要的调节作用。miRNA的结合位点通常位于mRNAs的3’ UTR（非翻译区域）[5]。RNA沉默中，miRNA的功能是通过碱基配对与靶mRNAs