2018微生物检验技术师考点.doc

word格式文档 专业整理 1.仪器的标识管理：红（停用）黄（准用）绿（合格）各自所表明的状态。 2.分光光度计检测细菌浓度用可见光分光光度计，测细菌波长用６００ｎｍ。检测蛋白用紫外分光光度计（波长用２８０ｎｍ），它也可测核酸浓度（波长２６０ｎｍ）。选定分光光度计测定颜色反应光的波长是４５０ｎｍ。石英比色皿用于紫外分光光度计，玻璃比色皿用于可见光分光光度计。 3．紫外透射仪 该仪器使用条件是暗室和紫外线，主要用于在紫外线下看ＤＮＡ条带。 4．色谱气相色谱可做微生物分类和鉴定，用于微生物的化学成分分析。液相色谱仪也可做微生物化学成分分析。质谱仪也可做微生物化学成分分析。 5．测序仪蛋白测序仪测定氨基酸排列顺序，ＤＮＡ测序仪是测核苷酸排列顺序。能做ＤＮＡ测序的物质是质粒、噬菌体、ＰＣＲ产物。 6．扩增仪 ＰＣＲ是聚合酶链反应缩写，能做ＰＣＲ称ＤＮＡ扩增仪。它能以一定ＤＮＡ片段为模板，变换温度，扩增该片段。常用的“枪”是实验室常用的微量可调移液器。 7．酶标做ＥＬＩＳＡ的仪器称酶标仪，做ＥＵＳＡ反应，其中主要设备有塑料凹孔板、洗板机和酶标仪。 8.电泳类别 醋酸纤维膜电泳可用于免疫球蛋白鉴定，琼脂免疫电泳用于蛋白分离和鉴定，对流免疫电泳可测抗原或抗体，火箭电泳测抗原量，交叉定量免疫电泳测抗原量。ＩＦＥ是等电聚焦电泳。 ＰＦＧＥ是脉冲电场凝胶电泳，ＰＡＧＥ是聚丙烯酰胺凝胶电泳。 9.ＰＡＧＥ 用于蛋白和核酸分离，原理是凝胶介质形成立体多孔网状结构，具有分子筛和电泳作用。分离条带上边是大分子，下边是小分子物质。过硫酸铵在ＰＡＧＥ制备起催化聚合作用。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ是十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳，它用于蛋白分离，在此电泳中，丙烯酰胺浓度越大，线性分离范围越小；该物浓度越小，线性分离范围越大，十二烷基硫酸钠作用是解离蛋白，用标准蛋白做标识测验电泳条带分子量。在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ中常用蛋白染料是考马斯亮蓝，硝酸银也是其常用染料。该电泳中缓冲液重要成分为甘氨酸。 10、等电聚焦电泳 其原理是以两性电解质制造凝胶有不同ｐＨ，使带不同电荷的多肽在电泳条件下于等电点停留。 两性电解质是制备该电泳凝胶不同ｐＨ重要物质，用聚丙烯酰胺制备等电聚焦电泳凝胶。这种电泳主要用于蛋白质分离。 11、脉冲电泳 脉冲电泳用于核酸分离，其优点是分离大片段核酸。用琼脂糖制备该电泳凝胶的介质。这种电泳的电场为正交的交变脉冲电场。脉冲电场凝胶电泳条带靠近负极为大片段ＤＮＡ，靠近正极为小片段ＤＮＡ。ＤＮＡ染色可用溴化乙锭，也可用硝酸银。因溴化乙锭有致癌作用，故在使用时应注意。丙烯酰胺具有神经毒，在用时注意个人防护。 12、琼脂糖凝胶电泳 此电泳用于核酸分离与纯化，用水平电泳槽。分离ＤＮＡ片段最佳范围为２００ｂｐ～５０ｋｂ。 13、聚丙烯酰胺电泳 该电泳通常用垂直电泳槽，分离ＤＮＡ片段是最佳范围是５～５００ｂｐ。 14.中华人民共和国国家标准GB 19489--2004《实验室生物安全通用要求》根据生物因子对个体和群体的危害程度将其分为4级： 危害等级Ⅰ（低个体危害，低群体危害）不会导致健康工作者和动物致病的细菌、真菌、病毒和寄生虫等生物因子。 危害等级Ⅱ（中等个体危害，有限群体危害）能引起人或动物发病，但一般情况下对健康工作者、群体、家畜或环境不会引起严重危害的病原体。实验室感染不导致严重疾病，具备有效治疗和预防措施，并且传播风险有限。 危害等级Ⅲ（高个体危害，低群体危害）能引起人或动物严重疾病，或造成严重经济损失，但通常不能因偶然接触而在个体间传播，或能用抗生素抗寄生虫药治疗的病原体。 危害等级Ⅳ（高个体危害，高群体危害）能引起人或动物非常严重的疾病，一般不能治愈，容易直接、间接或因偶然接触在人与人，或动物与人，或人与动物，或动物与动物之间传播的病原体。 15.保存的病原微生物菌（毒）种要按规定进行登记、上报和核准，实行双人双锁管理和使用审批制度。 保存和使用各类病原微生物菌（毒）种的实验室，应具备相应的实验室设备和设施条件，并在二级以上生物安全柜中操作。细菌实验室在污染情况超过许可程度时，通常采取甲醛熏蒸消毒。 病毒篇 1.用于病毒分离的材料，无论是传代病毒培养物，还是采自发病或死亡动物的病料，都应尽快送往实验室作病毒分离或鉴定。组织细胞或动物接种和传代可以应用于病毒的分离和鉴定。病毒对细胞的感染性具严格的选择性和特异性，因此用组织培养细胞接种病毒必须首先选择敏感细胞。 （1）病毒增殖的判定：病毒在实验动