检测生物组织中的糖类脂肪和蛋白质试验课.doc

PAGE PAGE 10 第三讲检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质(实验课)　　 　　　　　　eq \a\vs4\al(?对应学生用书P10?) 一、还原糖的检测 二、脂肪的检测 1．实验原理 脂肪＋苏丹Ⅲ(或苏丹Ⅳ)染液―→橘黄色(或红色) 2．方法步骤 (1)方法一：花生种子匀浆＋3滴苏丹Ⅲ染液→橘黄色。 (2)方法二： 结论：花生种子的子叶有脂肪存在。 三、蛋白质的检测 1．斐林试剂与双缩脲试剂比较 比较项目 斐林试剂 双缩脲试剂 成分 甲液 乙液 A液 B液 0.1 g/mL NaOH溶液 0.05 g/mL CuSO4溶液 0.1 g/mL NaOH溶液 0.01 g/mL CuSO4溶液 反应原理 含醛基的可溶性还原糖将Cu(OH)2还原为Cu2O沉淀 具有两个或两个以上肽键的化合物在碱性条件下与Cu2＋反应生成络合物 添加顺序 甲、乙两液等量混匀后立即使用 先加入A液2 mL摇匀，再加3～4滴B液摇匀 反应条件 50～65℃ 不需加热 反应现象 样液浅蓝色→棕色→砖红色 样液变紫色 相同点 都含有NaOH、CuSO4两种成分，且所用NaOH溶液浓度都是0.1 g/mL 2.注意事项 (1)三个实验中都不宜选取有颜色的材料，否则会干扰实验结果的颜色变化。 (2)脂肪鉴定的过程中滴加1～2滴体积分数为50%的酒精的目的是洗去浮色，原因是苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液易溶于酒精。 (3)蛋白质鉴定中，若用大豆作材料，必须提前浸泡；若用蛋清作材料，必须稀释，防止其黏在试管上不易刷洗；且该实验应预留部分组织样液作对比。 (4)物质鉴定实验一般不设立对照实验，若需设立对照实验，对照组应加入成分已知的物质，如验证唾液淀粉酶是蛋白质，对照组可加入稀释的鸡蛋清。 [易误提醒] ?1?易忽略斐林试剂本身的颜色。 非还原糖?如蔗糖?＋斐林试剂水浴加热后的现象不是无色而是浅蓝色[Cu?OH?2的颜色]。 ?2?易混淆双缩脲试剂和斐林试剂的使用。 混合后加入——斐林试剂，且现配现用；分别加入——双缩脲试剂?先加A液，后加B液，且B液不能过量?。 ?3?易写错“斐”和“脲字”。 “斐林试剂”中的“斐”不可错写成“非”，双缩脲试剂中“脲”不可错写成“尿”。 ?4?误认为脂肪的鉴定必须使用显微镜。 若要观察被染色的脂肪颗粒，则使用显微镜，但若要通过溶液颜色变化，则不必使用显微镜。 生物实验中的颜色反应 物质或结构 实验原理 注意事项 实践应用 还原糖 斐林试剂的甲液和乙液要等量混合均匀后方可使用，而且是现配现用，需要水浴加热 检验某糖是否为还原糖；不同生物组织中含糖量高低的测定；进行疾病的诊断，如糖尿病、肾炎等 脂肪 观察细胞中的脂肪颗粒，需要用显微镜观察 检测食品中营养成分是否含有脂肪 蛋白质 双缩脲试剂在使用时，先加A液再加B液，反应条件为常温(不需加热) 鉴定某些消化液中是否含有蛋白质；用于劣质奶粉的鉴定 淀粉 这里的碘是单质碘，而不是离子碘 检测食品中营养成分是否含有淀粉 DNA 二苯胺鉴定DNA需沸水浴加热 ①可以显示DNA在细胞中的分布 ②用于DNA粗提取实验的鉴定试剂 RNA 观察DNA和RNA在细胞中的分布时用的是甲基绿和吡罗红混合染色剂，而不是单独染色 可以显示RNA在细胞中的分布 线粒体 健那绿染液是一种活体染色剂，使用时细胞保持活性 可以用高倍镜观察细胞中线粒体的存在 酒精 酸性条件 探究酵母菌细胞呼吸的方式；制作果酒时检验是否产生了酒精；检查司机是否酒后驾驶 CO2 根据石灰水变混浊程度或溴麝香草酚蓝水溶液变黄的时间长短，可以检测酵母菌培养液中CO2的产生情况 染色体(或染色质) 严格控制染色的时间 用高倍镜观察细胞有丝分裂 实验材料的选择及常用处理方法和技术 1．选取实验材料的原则 (1)符合实验的要求： 选择的实验材料应含有符合实验目的要求的观察对象，如观察叶绿体，最好选用细胞内叶绿体数量较少、体积较大、叶片薄的植物细胞。如选择苔藓或黑藻叶片，可直接在显微镜下观察其单层细胞的部位，若用菠菜等高等植物叶片，撕取的表皮上一定要带有些叶肉细胞，因为叶表皮细胞没有叶绿体，不能选择根细胞，因为根细胞中不含叶绿体；观察线粒体要选择无色的细胞，如人的口腔上皮细胞，不能用叶肉细胞，因为叶肉细胞含有叶绿体，对观察线粒体有干扰；制备细胞膜不能选用鸡的红细胞，因为鸡的红细胞有细胞核及具有膜结构的细胞器，不容易获得纯净的细胞膜；观察动物细胞的细胞核不能选择哺乳动物成熟的红细胞，因为此细胞没有细胞核。 (2)符合实验的原理： 实验原理是完成实验的依据，选择的材料既要保证实验原理的实现，又要方便检测结果的观察，如在检测还原糖时不能选用甘蔗，因为它含有丰富的蔗糖，还原糖的含量少，不利于与斐林试剂发生反应；也不能选用西瓜汁，因为西瓜汁呈红色，会影响实验