类风湿关节炎发病机制的研究----自身反应性T细胞及骨桥蛋白在介导类风关发病中的分子免疫学机制-免疫学专业论文.docxVIP

L海第二医科大学博士学位论文类风湿关节炎发病机制的研究 L海第二医科大学博士学位论文 类风湿关节炎发病机制的研究 一自身反应性T细胞及骨桥蛋白在介导类风关发病中的分子免疫学机制 中文摘要 类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis，RA)是一种病因仍未十分清楚的器官 特异性的自身免疫性疾病，病变主要累及全身大小关节，最终导致关节强直，生 活自理能力丧失。在我国，RA发病率约为0．35．0．4％，目前尚无特异的和有效的 根治手段。RA发病的免疫学机制研究主要集中在两个方面：(1)自身反应性T 细胞在RA发病中的作用，及其TCRBV取用特征与HLA的关联性。(2)非特 异性的炎症因子及炎症调控因F在RA发病中所起的重要作用。本研究旨在从揭 示自身反应性T细胞及骨桥蛋白在介导RA发病中的分子免疫学机制阐明RA的 发病机理，为RA的免疫治疗奠定理论基础。 已有的研究结果提示致病性A身反应性T细胞克隆的大吊扩增导致了RA的 发病。然而RA作为一种自身免疫病，其自身抗原并不十分明确。因此本研究绕 开自身抗原和抗原特异性T细胞的传统研究方法，直接研究37例1LA,患者病灶 部位即关节滑膜组织浸润的受某种自身抗原驱动的T淋巴细胞抗原受体(T cell receptor,TCR)8链的取用格局。研究发现中国人群RA患者病灶关节滑膜浸润的 T淋巴细胞抗原受体主要取用BVl4和BVl6家族。采用Immunoscope技术分析 发现这些浸润的T细胞呈单克隆或寡克隆扩增，其TCR第三互补决定区 (Complementarity—determining Region，CDR)具有相同的CDR3长度。进一步采 用DNA序列分析证明这些CDR3带有相同的氨基酸序列(Common motif，共同 摹序)。同时采用PCR．SSP方法对上述RA患者的HLA进行了分型，研究发现 中国人群RA患者HLA基因型主要以HLA DRBl0405为主要特征，与白种人 RA患者完全不同(HLADRBl0401，*0404)。基于上述研究提示中国人群RA 患者病灶区自身反应性T细胞受到自身抗原的驱动而发生TCR BVl4和BVl6 的偏移，其中TCR BVl6的偏移为国内外首次报道。HLA DRBl*0405 RA患者 具有TCRBVl6取用的趋势，提示TCRBVl6取用受MHC的约束，可能为中国 RA人群所特有。TCR CDR3共同基序的发现为进一步研究自身反应性T细胞在 上海第二医科大学博士学位论文体内诱发免疫应答的分子机制和肽疫苗的研制奠定了理论基础。 上海第二医科大学博士学位论文 体内诱发免疫应答的分子机制和肽疫苗的研制奠定了理论基础。 众所周知，RA的病理特点为关节滑膜的慢性炎症，激活的T淋巴细胞，巨 噬细胞等炎症细胞浸润滑膜组织，通过炎症细胞释放的细胞因子及介质破坏滑膜 组织和关节软骨，导致软骨变性而丧失功能。RA发病机制非常复杂，为了研究 除传统的认为与RA发病有关的CII、HSP等自身抗原外，我们试图对其他有可 能参与RA发病的致病因子进行探索。我们首先用基因芯片技术筛选RA和OA 患者滑膜组织基因表达的差异，检测了14400个基因表达谱后发现RA患者滑膜 组织中骨桥蛋白(Osteopontin，OPN)表达明显增高，表达指数高达8．143，比 OA患者高8倍，提示OPN在RA发病中可能具有潜在作用。然而OPN参与RA 发病的作用机理并不十分清楚，因此本论文第二部分是在揭示T细胞介导RA发 病这一特异性途径的同时，研究OPN作为非特异性炎症因子或炎症调控闽子在 RA患者发病中的炎症病理作刚。 在上述基因芯片发现的基础上，我们进一步采用定量PCR和ELISA方法对 63例RA患者进行研究。研究结果发现RA患者关节滑液中淋巴细胞高表达OPN 基I天|，且丰要高表达在CD4+T淋巴细胞上，提示OPN主要由CD4+T细胞分泌。 用ELISA分析RA患者的血清和关节滑液，发现RA患者关节滑液中OPN蛋白 水平比相应血清OPN水平显著增高(p‘0．01)。细胞因子检测发现关节液中IFN．y， IL．12，IL—10，IL一1 8，TNF一Ⅱ比对照组升高，具有统计学差异(P0．05)，OPN 与IL．18呈IE相关趋势，与IL．5呈负相关趋势。研究结果提示OPN可能通过促 进Thl细胞因子的分泌，抑制’lh2细胞因子的分泌在RA发病中起作用。为了进 一步阐明OPN参与关节病变的可能途径，本文还研究了RA患者与其对照组OPN 受体的表达，发现RA患者关‘冉滑膜组织的OPN受体(伐v，p1，CD44)表达水 平增高。上述研究结果提示OPN作为一种细胞因子或细胞因子的调控因子参与 RA的发病。对OPN及其受体的研究可为针对RA新药开发提供新的潜在的靶分 子，为将来R