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* * 实验五 大肠杆菌感受态细胞的制备 一、感受态细胞的作用 当实验室获得了一个新的质粒时，而这个质粒并未转化到宿主菌内，则必须以该技术使细菌细胞处于易接受质粒的状态，以大量获得这一质粒。 二、原理 将快速生长中的大肠杆菌置于经低温预处理的低渗氯化钙溶液中，便会造成细胞膨胀（形成原生质球），使细菌处于容易吸收外源DNA的状态。 三、材料 E. coli DH5α（或JM105）菌株：细胞生长密度以刚进入对数生长期时为好，可通过监测培养液的OD600 来控制。DH5α菌株的OD600 为0.5时,细胞密度在5×107 个/ml左右(不同的菌株情况有所不同),这时比较合适。密度过高或不足均会影响转化效率。 其它材料还有无菌1.5mL的eppendorf管 四、试剂 1. LB固体和液体培养基： 胰蛋白胨 10g 酵母提取物 5g NaCl 10g 5mol/L的NaOH调pH至7.0 2. 0.05mol/L CaCl2 （或0.1mol/L） 所有试剂均需高温高压灭菌。 五、操作步骤 １：从LB平板上挑取新活化的E. coli DH5α单菌落,接种于3-5ml LB液体培养基中,37℃下振荡培养12小时左右,直至对数生长后期。将该菌悬液以1:100-1:50的比例接种于100ml LB液体培养基中,37℃振荡培养2-3小时至OD600 ＝0.5左右。 ２：取1ml细菌培养物置于1.5mL的eppendorf管 中，冰浴15min，8000rpm,离心1min.收集菌体，冰浴放置 ３：用预冷的氯化钙悬浮菌体，8000rpm,离心1min.收集菌体，冰浴放置 *
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