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革兰氏痰涂片的镜下怎样描述报告 　　革兰氏染色法的原理及其练习　　摘要：革兰氏染色反应是细菌重要的鉴别特征，所以学习微生物学，进行革兰氏染色实验是很重要的。为保证染色结果的正确性，采用规范的的染色操作方法是十分必要。本实验主要对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌进行革兰氏染色，观察它们的染色特征，辨别是革兰氏阴性还是阳性，从而掌握其染色方法。染色方法与过程很清晰，但实验结果中金黄色葡萄球菌(Rosenbach）多组呈现假阴性。本实验的主要目的是熟悉并掌握革兰氏染色方法及原理，但要想做出很好的染色得多加练习。本实验还可以锻炼显微镜操作技术和无菌操作技术。关键词：革兰氏染色大肠杆菌()金黄色葡萄球菌(S.aureusRosenbach)枯草杆菌()　　引言　　革兰氏染色是微生物学中最重要的鉴别染色方法，它可以直接将细菌分为革兰氏阴性和革兰氏阳性。革兰氏染色法可将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两种类型，这是由这两种细菌细胞壁结构组成与结构的差异所决定的。经过一定的染色过程后，革兰氏阳性的细菌会因为细胞壁肽聚糖的含量高，脂质含量低而保持第一次染色的蓝紫色。革兰氏阴性细菌细胞壁的脂质含量高，乙醇处理时脂质溶解，蓝色被洗脱，复染后变为红色。革兰氏染色原理很简单，染色时需注意要注意使用处在活跃生长期的细菌，涂片不宜过厚，严格控制脱色时间。　　大肠杆菌()是革兰氏阴性细菌，金黄色葡萄球菌(S.aureusRosenbach)与枯草杆菌()都是革兰氏阳性细菌，染色后在显微镜下容易区别。同时它们的形态各异，可以根据具体颜色和形态差异来判断染色是否成功。　　本实验还涉及到高倍油镜的使用。使用油镜与用一般的镜头不同，具体使用在实验方法中描述。　　材料　　菌种　　大肠杆菌16小时牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物，金黄色葡萄球菌16小时牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物，枯草杆菌16小时牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物。　　溶液与试剂　　无菌生理盐水，草酸铵结晶紫染液，卢戈氏碘液，95%乙醇，番红复染夜，香柏油，二甲苯　　仪器　　酒精灯，载玻片，显微镜，双层瓶，接种环，滴管等　　方法　　制片：取活跃生长期菌种按常规方法涂片、干燥和固定。　　染色　　初染：滴加草酸结晶紫染液覆盖涂菌部位，染色2min，水洗至流出水无色。　　媒染：用卢戈氏染液冲去残留水迹，再用碘液覆盖1min，倾去碘液，水洗至流出水无色。　　脱色：将玻片上的水用吸水纸吸取，用滴管流加95%乙醇脱色，稍后立即洗去乙醇。　　复染：将玻片上的水用吸水纸吸去，用番红复染液染色2min，水洗，吸去残水烤干。　　镜检　　分别用香柏油覆盖涂菌部位，先用低倍镜找到菌，换用　　色情况。观察结束后，用二甲苯擦洗镜头。的物镜观察染　　2．实验结果与分析　　结果分析　　大肠杆菌竟革兰氏染色后呈现红色，3个图片上都是红色，因此大肠杆菌应该是革兰氏阴性细菌，与事实相符，染色成功。　　金黄色葡萄球菌比较难染色，从结果中可以分析，前两个涂片的菌种可能培养　　的时间太长了。因为老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性，老龄的G+细菌细胞壁老化，不能在乙醇处理的时候使肽聚糖网孔收缩而使碘-结晶紫复合物滞留在细胞壁，从而在复染时被染红。　　枯草杆菌染色结果很好，蓝紫色很明显，染色成功。　　小结　　1、获得本实验成功的关键：固定时烘烤要适度，太轻会在冲洗时冲走细菌，过度会破坏细菌形态；脱色的时间要严格控制，脱色不够造成假阳性，脱色过度会出现假阴性；选用新培养的菌种，涂片时不能太厚。这些问题在实验过程中几乎都有出现，尤其是对于初学者，特别需要注意。　　2、革兰氏染色可以迅速将细菌分为阴性和阳性，是很重要的染色方法，也是相当复杂的染色方法。通过练习革兰氏染色，既掌握了一般的染色方法，又为以后技术要求更高的染色，观察，鉴别奠定了基础。　　革兰氏染色镜检的操作规程　　1.目的：鉴定G阳性菌.G阴性菌。指导临床用药。　　2.原理：　　革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家所创立的，此方法可将所有的细菌分G+和G-两大类，G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄，交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染性的颜色。　　3.实验器材：载玻片、接种杯、酒精灯、擦镜纸、显微镜。4.试剂：　　试剂　　R1结晶紫1χ10mlR2碳酸钠1χ10mlR3碱性碘液1χ10mlR4丙酮酒精1χ20mlR5碱性复红1χ10ml5.标本采集与处理：　　阴道,子