拟穴青蟹两个新型Crustin的克隆与表达分析.PDFVIP

doi:10.6043/j.issn.0438-0479.201902012 拟穴青蟹两个新型Crustin 的克隆与表达分析 1,4 1,4 1,4 2 1,2,3,4* 张财亮 ，黄贝 ，熊静 ，陈芳奕 ，黄文树 （1.集美大学水产学院，福建 厦门 361021 ；2.海洋生物制备技术国家地方联合工程实验 室,福建 厦门 361102；3.农业部东海海水健康养殖重点实验室,福建 厦门 361021；4.福 建省海洋生物资源开发利用协同创新中心，福建 厦门361021 ） 摘要：Crustins 是一类广泛存在于甲壳动物中富含半胱氨酸的阳离子抗菌肽，可参与抗细菌 和抗病毒等免疫应答。从拟穴青蟹中克隆获得两个新型Crustin 基因，分别命名为SpCrus1b ) 和SpCrus2b 。预测SpCrus1b 和SpCrus2b 前体肽包含N-端信号肽和C-端成熟肽两部分，成 版 熟肽均含有 12 个位置高度保守的半胱氨酸。SpCrus1b 在信号肽和WAP 结构域之间，存在 学 一个半胱氨酸富集区，属于典型的Ⅰ型Crustins ；SpCrus2b 除具有SpCrus1b 的结构特征外， 科 在近N-端额外含有一个甘氨酸富集区，属于典型的Ⅱ型Crustins 。SpCrus1b 基因组为4 个 然 外显子/3 个内含子结构，而SpCrus2b 为2 个外显子/1 个内含子结构。在正常养殖的青蟹 自 中，两者均主要在鳃中表达。经脂多糖 （LPS ）刺激24 h 和聚肌胞苷酸 （PolyI:C ）刺激12h ( 后，可引起两者表达极显著上调（p 0.01 ），表明SpCrus1b 和SpCrus2b 参与了拟穴青蟹抗 报 细菌和抗病毒免疫过程。 学 关键词：抗菌肽；Crustin ；基因克隆；基因组；表达分析；拟穴青蟹 学 中图分类号: Q786 文献标志码: A 大 门 抗菌肽 （antimicrobial peptides ，AMPs ），又称宿主防御肽，是机体先天免疫系统的重 厦 要组成部分。它不仅可以抑制/杀灭多种病原体，亦可激发机体的其他抗病免疫相关反应， [1] 因此被喻为“抗生素的天然替代物”而倍受关注 。目前，全球已经建立了多个抗菌肽数据 库，其中APD （the Antimicrobial Peptide Database ，/AP/main.php ）最具影 响力。截止到2019 年 1 月 1 日，该数据库共收集抗菌肽3048 种，其中甲壳动物中发现约 60 种，主要包括Crustins[2]、Penaeidins[3]、ALFs[4]、Lysozymes[5]和Histones[6]等家族。 收稿日期：2019-02-16 录用日期：2019-04-14 基金项目：国家自然科学基金（U205123 ）；海洋生物制备技术国家地方联合工程实验室（厦门 大学）开放课题基金（201807 ） *通信作者：wshuang@ [7] Crustins 是甲壳动物中研究较早、种类较多的抗菌肽家族 。首个Crus