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直链淀粉/支链淀粉测定试剂盒 用于测定淀粉中的直链淀粉和支链淀粉含量 AMYL 11/99 简介: 决定谷物淀粉最终的特殊用途取决于淀粉众多特性中的直链淀粉/支链淀粉比率，因此，对于淀粉加工企业，淀粉中直链淀粉含量是一项非常重要的指标。 测定谷物淀粉中的直链淀粉通常采用电位测定法、糊化染色法或旋光分析法，即通过测定碘与直链淀粉结合生成直链淀粉-碘复合物的方法来评估直链淀粉含量，然而由于支链淀粉-碘复合物在此过程中同样会形成，因此这些方法的准确性常遭到质疑。利用非比色方法测定游离碘离子的减少和通过比色测定直链淀粉-碘复合物的方法会导致高估直链淀粉的含量，是用此方法可能出现的更多问题请参考Gibson et al11。 目前， HYPERLINK / 国际上普遍采用结果更加准确的利用伴刀豆凝集素A(Con A)沉降支链淀粉，然后测定直链淀粉含量的方法，在特定的温度、pH和离子强度下，Con A可以特定的连接含吡喃葡萄糖基[a-D-glucosepyranosyl]或吡喃甘露基[a-D-mannopyranosyl]的支链多聚糖，因此会优先于直链淀粉与支链淀粉形成沉淀复合物。 原理: 加入二甲基亚砜(DMSO)的淀粉样品通过加热被完全溶解，乙醇洗脱样品中的油脂，回收洗涤后的淀粉样品，并用醋酸/钠盐溶液溶解，加入Con A后支链淀粉被特异性的沉降，离心分离支链淀粉，保存于悬浮液中的直链淀粉被酶水解生成葡萄糖，利用葡萄糖氧化酶/过氧化物酶测定葡萄糖的含量。溶解于醋酸/钠盐溶液中的总淀粉同样可以被水解成葡萄糖，并利用萄糖氧化酶/过氧化物酶测定葡萄糖。在510nm测定利用Con A沉降后悬浮液中GOPOD吸光度的比率变化来计算直链淀粉的浓度，同样道理可计算出总淀粉浓度。 此方法适用于所有的纯净淀粉样品和谷物面粉。 精确性: 对于纯净淀粉和~10%的谷物面粉，批内偏差5% 试剂盒: 试剂盒内提供有足够50-100次试验用的试剂 分析方法 冻干Con A (200mg) 淀粉葡萄糖苷酶/真菌α-淀粉酶悬浮液 葡萄糖测定液 葡萄糖反应缓冲液 葡萄糖标准液 淀粉参考标样（含有特定的直链淀粉） 安全手册: DMSO可通过皮肤吸收，对皮肤和眼睛具有刺激性，试验过程中，必须穿戴实验室操作服和眼镜，并避免溶液滴溅，如有条件可在通风橱中操作，或在空气流通的实验室进行试验，如有溅洒，用大量清水冲洗。 伴刀豆凝集素A具有毒性，应避免吸入、皮肤接触和摄食，操作时必须穿戴实验室操作服和眼镜。 制备酶： (A) 淀粉葡萄糖苷酶[2ml]+ 真菌α-淀粉酶 用20ml醋酸钠缓冲液(100mM, pH 4.5)溶解，分装于5ml的聚丙烯试管中，-20°保存。使用溶解后的酶进行试验。 制备试剂： (A) Con A溶液 (4.0mg/ml) 用50ml的Con A缓冲液（缓冲液3）溶解试剂盒中提供的Con A冻干粉(200mg)，分装并在-20°保存。 (B) GOPOD试剂 用蒸馏水稀释全部的葡萄糖反应缓冲液到1L，使用稀释后的葡萄糖反应缓冲液稀释葡萄糖测定液。 缓冲液稀释后浓度： 葡萄糖氧化酶 12,000 U/升 过氧化物酶 650 U/升 4-氨基安替比林 0.4 mM 稳定性：4°C保存，2-3个月或-20°C保存，12个月 葡萄糖标准溶液 葡萄糖标准溶液（100μg/0.1ml；保存于0.2%的苯甲酸中），室温保存 5年。 淀粉参考标样 瓶签上标注有直链淀粉含量 缓冲液（试剂盒中未提供） 1. 醋酸钠缓冲液(100mM, pH 4.5) 5.9ml冰醋酸(,1.05g/ml)加入900ml蒸馏水，用1M NaOH(4g/100ml)调节pH到4.5（大约需要30ml），然后加入叠氮化钠(0.2g)并补液至1L。室温中保存。 注意： 叠氮化钠是一种有毒化学物质应妥善保存。叠氮化钠是葡萄糖缓冲液稳定剂，稀释操作过程中必须带防护手套进行操作。 二甲基亚砜对皮肤具有刺激性，应谨慎使用。 2. 浓缩Con A缓冲液(pH 6.4, 600mM) 无水醋酸钠(BDH Cat No: 10236) -------------------49. 氯化钠(BDH Cat. No: 10241)----------------------- 175.5g CaCl2.2H2O (Mallinckrodt Cat. No: 4160)------------ MgCl2.6H2O (BDH Cat. No: 10149) ------------------ MnCl2.4H2O (Ajax Cat. No: 307) --------------------- 将上述试剂溶解于900ml蒸馏水中，滴加冰醋酸调节pH到6.4，用蒸馏