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微生物的染色实验报告 　　一、实验题目：微生物的革兰氏染色　　二、实验目的：　　1、学习并初步掌握革兰氏染色法；　　2、了解革兰氏染色的原理；　　3、巩固显微镜的使用。　　三、实验原理：　　革兰氏染色是1884年丹麦病理学家ChristainGram氏创立的，是细菌学中最重要的鉴别染色法。染色步骤分为四个部分：　　1、初染：加入碱性染料结晶紫固定细菌图片；　　2、媒染：加入碘液，碘与结晶紫形成一种不溶于水的复合物；　　3、脱色：利用有机溶剂乙醇或丙酮进行脱色；　　G-和G+细胞壁的比较：　　1、阳性菌细胞壁特点：细胞壁厚，只有一层，主要由肽聚糖构成，肽聚糖含量高，结构紧密，脂类含量低。当乙醇脱色时，细胞壁肽聚糖层孔径变小，通透性降低，结晶紫和碘的复合物被保留在细胞壁内，复染后仍显紫色。　　2、阴性菌细胞壁特点：细胞壁薄，由两层构成，内壁层和外壁层，细胞壁中脂类中脂类物质含量较高，肽聚糖含量较低，网状结构交联程度低，乙醇脱色时溶解了脂类物质，通透性增强，结晶紫与碘的复合物易被乙醇抽提出来，因此，革兰氏阴性菌细胞被脱色，当复染时，脱掉紫色的细胞的细胞壁又着上红色。　　四、实验器材：　　1、菌种：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌。　　2、溶液和试剂：革兰氏染液、草酸铵结晶紫染液、碘液、95%乙醇、番红复染液、水。　　3、仪器及其他用品：酒精灯、载玻片、显微镜、接种环、试管架、滤纸、滴管。　　五、实验步骤：　　1、取一个载玻片，将其洗净并沿一个方向擦拭干净，直至液体不再其上收缩为止；将接种环整平，用灼烧过的接种环在混匀的菌种中取菌，按常规方法图片，应涂大，不宜过厚。　　2、打开酒精灯，用火焰固定，不宜烤得太狠，否则菌种呈假阳性。　　3、轻旋结晶紫染液滴管，将其旋出，滴加1滴草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部位，染色40s。　　4、染色完成后倾去染液，水洗至流出水为无色。　　5、将玻片上残留水用滤纸吸去，待其干燥。　　6、在涂菌部位滴加碘液，覆盖1min。　　7、媒染完成后，倾去碘液，水洗至流出水无色。　　8、将玻片上残留水用滤纸吸去，待其干燥。　　9、将载玻片放在白色笔记本上，用滴管滴加95%乙醇脱色，脱色30~40s，不宜脱色太狠，否则菌种呈假阴性。　　10、脱色完成后立即用水洗去乙醇。　　11、将玻片上残留水用滤纸吸去，待其干燥。　　12、滴加番红复染液，染色4min。　　13、染色完成后，水洗至流出水无色。　　14、吸去残留水并晾干。　　15、用显微镜观察并绘图。　　用以上步骤完成：大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的混合图片染色、大肠杆菌单独菌种染色、金黄色葡萄球菌单独菌种染色。　　六、注意事项：　　1、选用活跃生长期菌种染色，老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性。　　2、图片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性。　　3、脱色是革兰氏染色是否成功的关键，脱色不够造成假阳性，脱色过度造成假阴性。　　七、实验结果与讨论：　　1、结果：　　绘出高倍镜下观察的菌体图像。　　2、思考题：　　写出常见的革兰氏阳性菌与阴性菌，包括致病菌。　　革兰氏染色的原理是什么？印象因素有哪些？　　如何验证你的染色结果是否正确？　　实验二细菌的普通染色和革兰氏染色　　一、实验目的　　1．掌握细菌涂片标本的制备方法和普通染色的步骤；2．掌握革兰氏染色法的步骤和关键点；3．识别细菌的革兰氏染色结果；4．学习无菌操作技术。　　二、实验原理　　一般认为革兰阳性细菌的肽聚糖层较厚，经乙醇处理后使之发生脱水作用而使孔径缩小，结晶紫与碘的复合物保留在细胞内而不被脱色；而革兰阴性细菌的肽聚糖层很薄，脂肪含量高，经乙醇处理后部份细胞壁可能被溶解并改变其组织状态，细胞壁孔径大，不能阻止溶剂透入，因而将结晶紫与碘的复合物洗去而被脱色。　　虽然如此，革兰染色的差异并不能完全认为是化学的差别，也有物理结构不同的结果，因为酵母菌细胞壁的成份完全和细菌不同，但具有革兰染色阳性反应。　　三、实验器材　　载玻片，盖玻片，接种环，酒精灯，显微镜、擦镜纸、镜油、擦镜液；结晶紫、革氏碘染液、95%酒精、番红染液；　　枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和未知菌的18小时的液体培养液，酵母菌平板，大肠杆菌平板，牙垢。　　四、实验步骤　　1、涂片　　左手持菌液EP管，右手持接种环，在火上对接种环灭菌后，从EP管中取一环培养液，于载玻片中央涂成薄层，将接种环在火焰上烧灼灭菌。若是从平板上取材，则事先在载玻片上滴一小滴水，在火焰附近把平板打开一小口，用接种环调取菌落边缘的物质涂于水滴上。　　室温下自然干燥。2、固定　　手持或镊子夹载玻片一端，标本面朝上，在灯的火焰外侧快速来回移动3~4次，