课件：霉菌与酵母菌.ppt

一、检验程序 检样→处理→稀释→平板分离培养→菌落计数→报告 二、操作要点 （一）、采样 1、粮食(包括粮库贮粮，粮店或家庭小量存粮)样品的采集，可根据粮囤或粮垛的大小和类型，分层定点取样，一般可分三层五点，或分层随机采取不同点的样品，充分混合后，取500g左右送检。小量存粮可使用金属小勺采取上、中、下各部位的混合样品。 　 2、海运进口粮的采样：每一船仓采取表层、上层、中层及下层四个样品，每层从五点取样混合，如船仓盛粮超过10000t，则应加采一个样品。必要时采取有疑问的样品送检。 3、谷物加工制品(包括熟饭、糕点、面包等)、发酵食品、乳及乳制品以及其他液体食品，用灭菌工具采集可疑霉变食品250g，装入灭菌容器内送检。 （二）、样品处理（稀释） 1、以无菌操作称取检样25g(或25mL)，放人含有225mL灭菌水的玻塞三角瓶中，振摇30min，即为1：10稀释液。 2、用灭菌吸管吸取1∶10稀释液10mL，注入试管中，另用带橡皮乳头的1mL灭菌吸管反复吹吸50次，使霉菌孢子充分散开。 3、取1mL1∶10稀释液注入含有9mL灭菌水的试管中，另换一支1mL灭菌吸管吹吸5次，此液为1∶100稀释液。 （三）、培养 倒置于25～28℃温箱中，3d后开始观察，共培养观察5d。 （四）、计数 选取菌落数10～150之间的平板进行计数。（稀释度选择和菌落报告方式参考菌落总数的测定） 检测中的注意事项： 1、取样的代表性。 2、取样工具的无菌。 空气中霉菌的孢子含量很高，所以，取样的工具、容器等要经过严格的高压灭菌。 3、检样的方法。 （1）、由于霉菌易被携带，所以，检样时操作人员应尽量避免自身携带的可能。 （2）、样品的均质及充分振摇。因为有些孢子是连成串的，故均质和振摇能使其充分散开，同时，在各梯度连续稀释时，也要用灭菌吸管反复吹吸几次，使孢子充分散开。 4、培养温度和时间。培养温度25-28℃培养，3天后观察，需培养观察一周。 检样中常见的问题： (1) 不同稀释度计数结果相同。 (2) 不生长或生长很好连成片无法计数。 原因： （1）稀释时未经反复振摇，吹吸，导致孢子未充分散开，影响了计数的结果。 （2）由于培养基不适宜，PH值低等，致使生长较慢。 （3）观察时间的掌握。真菌生长较慢，故需3d后才能观察出结果。每天都要观察结果。 培养基机理 1.高盐察氏培养基 主要机理：该培养基是一种合成培养基，适用于分离霉菌。并在高浓度的氯化钠下，可消除细菌的干扰。适用于粮食，如米、麦粒等中霉菌的检测。 2.孟加拉红培养基 主要机理：孟加拉红是一种抑制细菌生长剂，并不是一种指示剂；氯霉素是一种广谱抗生素，起杀死细菌作用。该培养基适用于分离霉菌和酵母。 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 黄曲霉毒素 AFB1难溶于水，易溶于甲醇、丙酮和氯仿等有机溶剂，但不溶于石油醚、己烷和乙醚中。一般在中性及酸性溶液中较稳定，但在强酸性溶液中稍有分解，在pH 9-10的强碱溶液中分解迅速，但此反应可逆，即在酸性条件下又能恢复原来结构。 黄曲霉毒素 AFB1对热非常稳定, 268-269℃方可破坏, 故一般烹调温度不破坏其毒性。某些化学试剂如5%次氯酸钠和丙酮可使AFB1完全分解，因此在实验室中用此方法对接触过AFB1的器皿作解毒处理。但在紫外线照射可使之分解。 2.黄曲霉毒素产生的条件 仅黄曲霉和寄生曲霉能产生黄曲霉毒素。 黄曲霉产毒的好发食品 植物性食品：玉米、麦类、大米、花生及其制品、棉籽、树生坚果（巴西胡桃、杏仁、美国山核桃、榛子、阿月浑子果）。 动物性食品：乳及乳制品。 黄曲霉的生长 自然条件下，黄曲霉生长繁殖及产生AF所需要的温度范围为12℃～42℃，最适温度为25℃～32℃，最低相对湿度为80%左右。该数值相当于小麦、玉米和高粱中水分含量为18.0%～18.5%、稻谷为16.5%、大米为17.5%、大豆为17%～18%、花生及其他树果为9%～10%。 黄曲霉的生长 黄曲霉生长所需的条件决定了该菌是全世界分布最广的菌种之一，在我国各省均有分布。而寄生曲霉从美国夏威夷、阿根廷、巴西、荷兰、印度、印度尼西亚、日本、约旦、波兰、期里兰卡、土耳其、乌干达等国的农作物中分离出。 黄曲霉的生长 我国广西、江苏、江西、湖北、黑龙江、山东、安徽、湖南、陕西、吉林、辽宁、河南、河北、四川、浙江和甘肃共17个省粮食中分离到的黄曲霉菌株的产毒性能进行了研究，结果表明，除甘肃省外，其他16个省均分离出产AFB1菌株，分布情况是，华中、华南和华东地区产毒菌株多，产毒量也高，产毒在10 mg/kg 以上的强毒株占10%以上。东北和西北地区产毒株较少，产毒量也低，可能与当地寒