采用离子色谱法对黄酒中氨基酸的比较研究探究doc-省级科研计文档.doc

采用离子色谱法对黄酒中氨基酸的比较研究 诸葛庆，李博斌，刘兴泉，郑云峰 （国家黄酒产品质量监督检测中心 绍兴 312071） 摘要：准确测定黄酒中的氨基酸对研究黄酒的营养价值和黄酒风味具有重要的意义，本研究采用了阴离子交换色谱法-积分脉冲安培检测法测定了江西、绍兴、福建三地黄酒中的氨基酸。分析结果显示，绍兴黄酒、福建黄酒的氨基酸总量较高，平均含量分别是3946.56mg/L、3726.80 mg/L，江西黄酒氨基酸含量为1634.33 mg/L，每种黄酒的呈味氨基酸以甜味氨基酸和苦味氨基酸为主，它们占80%左右。 关键词：阴离子交换色谱法；积分脉冲安培检测；氨基酸；黄酒 黄酒是我国的民族特产，黄酒是以稻米、黍米、玉米、小米、小麦等粮食为主要原料，经蒸煮、糖化、发酵、压榨、过滤、贮存、勾兑等工艺生产的酿造酒。黄酒酒精度低、耗粮较少、富含多种氨基酸、蛋白质、维生素和对人体有益的矿物元素，营养丰富[1]。黄酒中含有多种多量的氨基酸，黄酒中的氨基酸主要是曲霉菌的酸性蛋白霉和酸性羧肽酶对蒸煮后的原料米中的蛋白质起作用而产生的，是黄酒中的主要成分之一，不仅是黄酒的营养成分，也是黄酒的风味物质或风味的前驱体，对黄酒的风味起着重要作用[2,3]。氨基酸具有鲜、甜、苦、涩等多种味感，赋予了黄酒丰富的味觉层次，使黄酒具有鲜美、醇和、浓郁、柔润、协调和多滋多味的特征[4]。 黄酒中的呈味氨基酸与黄酒的风味有着很大的联系，因此准确的对黄酒中的氨基酸进行定性和定量分析是非常有必要的。但是氨基酸种类繁多、性质接近，氨基酸分析是色谱界公认的难题。现在常用的方法有离子交换色谱法，基于反相色谱分离、柱前衍生、荧光或紫外检测的高效液相法，阴离子交换分离直接安培法检测的离子色谱法，衍生化气相色谱法和毛细管电泳法，这些方法在检测氨基酸方面还存在一定的不足。本研究所用的高效阴离子交换色谱-积分脉冲安培检测法（HPAEC-IPAD）是一种新的氨基酸分析方法[5]。此方法是基于氨基酸分子中的羧基在强碱性介质中可以形成阴离子，而氨基酸分子中的氨基在强碱性介质中通过施加一定的电位，可在贵金属（金、铂）电极表面发生氧化反应，从而实现氨基酸的阴离子交换色谱分离和积分脉冲安培检测[6,7,8]。 1 实验部分 1.1仪器和试剂 美国Dionex DX-600型离子色谱仪，配有GS50四元梯度泵，AS40自动进样器，AS50色谱柱室，ED50电化学检测器，Peak Net色谱工作站。17种氨基酸混合标样，乙酸钠（Dionet,USA），氢氧化钠、叠氮化钠为分析纯。 标准溶液的配制：用20mg/L叠氮化钠水溶液配制成氨基酸标准溶液。 淋洗液：去离子水、0.25mol/LNaOH、1.0mol/LNaAc。 1.2色谱条件 色谱柱：AminoPac PA10阴离子交换柱，包括分析柱（2×250mm）和保护柱（2×50mm）。 淋洗条件：采用梯度洗脱，梯度淋洗条件见表1， 流速：0.25mL/min。 检测条件：积分脉冲安培法检测。 柱温：30℃。 进样体积：25?L 表1 分离氨基酸的梯度淋洗程序 Time (min) Water (%) 0.25 mol/L NaOH(%) 1 mol/L NaAC(%) Curve 0.0 93 7 2.0 90 10 5 5.0 85 15 8 11.0 64 36 8 13.0 64 36 15.0 60 40 8 20.0 30 70 8 25.0 30 70 25.1 27 70 3 8 33.0 23 70 7 8 38.0 20 70 10 8 45.0 10 70 20 8 50.0 10 30 60 8 60.0 10 30 60 1.3 样品前处理 样品在分析前用去离子水稀释500倍，经过0.45μm的滤膜过滤直接进样分析。 ２ 结果与讨论 2.1氨基酸的色谱分离 实验所测定17种氨基酸标样色谱图见图1。 图1氨基酸标准色谱图 从图1中可以看出，17种氨基酸在选定的分离条件下可以达到很好的分离。 2.2方法的检出限、线性范围及回收率 根据以上的分离条件，对氨基酸的混合标样进行测定，得出了该方法的检出限、线性范围，同时还分析了各种氨基酸的回收率，所得的数据见表2。 表2方法的检出限、线性范围及回收率 化合物名称 检出限 μmol/L 回归方程 相关 系数 线性范围μmol/L 加入量 μmol/L 实测值 μmol/L 回收率 % 精氨酸 0.0095 1.15X-0.35 0.9990 0.2～20 5.00 4.93 98.6 赖氨酸 0.0589 0.32X+0.11 0.9989 0.2～20 2.50 2.57 102.8 丙氨酸 0.0209 1.01X+0.99 0.9976 0.2～20 10.00 9.69