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全血dna提取实验报告 　　授课教师常祖明学生人数课题　　授课类型授课方法讲授、演示　　教学用具多媒体、实验室设备教学目的　　教学重点理解实验过程中每一步操作的目的及原理教学难点　　教学过程　　一、实验目的　　1.掌握鸡血DNA提取的原理；　　2.掌握鸡血DNA提取的方法及操作过程。　　二、实验原理　　哺乳动物的成熟红细胞已经高度分化，因而当中没有细胞核，无法提取DNA。禽类的血细胞则可以。　　禽类代谢旺盛，血液中红细胞更多，而且红细胞中有完整的细胞核、大量的染色体。且材料易得、经济。用　　鸡血细胞做实验材料有两个原因。一是因为鸡血细胞核的DNA含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸　　水胀破，而用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长。　　三、实验仪器　　1.水浴锅：55℃　　2.离心机：8000转、1XX转　　3.离心管：5ml　　4.移液枪：10μl、680μl、700μl、800μl、900μl、1ml　　5.容量瓶：100ml　　6.取血针及管　　四、实验材料及药品　　实验材料：普通家鸡：需血液　　1.无水乙醇　　作用：DNA沉淀剂、洗涤剂。　　商品信息：瓶/500ml，分析纯AR。　　理化性质：无色澄清液体。有灼烧味。易流动。极易从空气中吸收水分，能与水和氯仿、乙醚等多种　　有机溶剂以任意比例互溶。　　储存：储存于阴凉、通风的库房。远离火种、热源。库温不宜超过30℃。保持容器密封。应与氧化剂、　　酸类、碱金属、胺类等分开存放，切忌混储。采用防爆型照明、通风设施。禁止使用易产生火花的机械设备　　和工具。　　危害：易燃，具刺激性。蒸气与空气能形成爆炸性混合物，爆炸极限%～%。　　2.柠檬酸　　作用：ACD抗凝血剂成分之一。在抗凝剂中，中和柠檬酸钠的碱性。　　商品信息：分析纯AR，白色塑料瓶/500g，　　理化性质：无臭，有很强的酸味，白色粉末或颗粒，易溶于水和醇。在潮湿的空气中微有潮解性。　　储存：在湿空气中有轻微潮解，需阴凉密封干燥保存。　　危害：柠檬酸浓溶液对黏膜有刺激作用。柠檬酸可燃。粉体与空气可形成爆炸性混合物，遇明火、高热　　或与氧化剂接触，有引起燃烧爆炸的危险。　　3.柠檬酸钠　　作用：ACD抗凝血剂成分之一。能与血液中的钙离子结合成螯合物，而使钙离子失去凝血作用，从而阻止血液凝固。　　商品信息：柠檬酸三钠分析纯500克/瓶。　　理化性质：有机化合物，外观为白色到无色晶体。无臭,有清凉咸辣味。常温及空气中稳定,在湿空气中微有溶解性,在热空气中产生风化现象。加热至150℃失去结晶水。易溶于水、可溶于甘油、难溶于醇类及其他有机溶剂，过热分解，在潮湿的环境中微有潮解，在热空气中微有风化，其溶液pH值约为8。　　储存：常温密闭保存　　危害：无毒　　4.尿素　　作用：禽血裂解液成分之一。尿素能非常有效地使蛋白质变性，尤其能非常有效地破坏非共价键结合的蛋白质。　　商品信息：化学试剂分析纯500克/瓶　　理化性质：无色柱状结晶或白色结晶性粉末，溶于水，乙醇和苯，难溶于乙醚，不溶于氯仿。　　储存：密封避光保存。　　危害：避免与皮肤和眼睛接触。　　5.十二烷基硫酸钠(SDS)　　作用：禽血裂解液成分之一。裂解核酸-蛋白质复合体，用于从蛋白质中分离核酸。　　商品信息：500g/分析纯AR。　　理化性质：白色或淡黄色粉末。溶解性：溶于水，呈透明溶液，溶液呈中性。易溶于热水，溶于水，溶于热乙醇，微溶于醇，不溶于氯仿、醚。　　储存：密封阴凉干燥保存防止受潮受热　　危害：对粘膜和上呼吸道有刺激作用，对眼和皮肤有刺激作用。可引起呼吸系统过敏性反应。该品可燃，具刺激性，具致敏性。遇明火、高热可燃。受高热分解放出有毒的气体。　　6.1MTris-HCl()缓冲液　　作用：禽血裂解液成分之一。提供一个缓冲环境，防止DNA被破坏　　商品信息：瓶/100ml，无色、澄清溶液　　理化性质：Tris中文品名为三羟甲基氨基甲烷，瓶/500g。是一种白色结晶或粉末。溶于乙醇和水，微溶于乙酸乙酯、苯，不溶于乙醚、四氯化碳，对铜、铝有腐蚀作用，有刺激性的化学物质。　　储存：室温保存。　　危害：毒性低，可致癌，不要直接接触皮肤。　　7.乙二胺四乙酸二钠　　作用：配制EDTA溶液。螯合Mg或Mn离子,抑制脱氧核糖核酸酶活性，活2+2+　　性依赖于钙离子，并能被镁离子或二价锰离子激活。　　商品信息：瓶/250g。　　理化性质：无味无臭或微咸的白色或乳白色结晶或颗粒状粉末。溶于水，不溶于乙醇、乙醚，其水溶液pH值约为。可由EDTA与氢氧化钠和碳酸钙作用制得。　　储存：于阴凉、通风的库房。远离火