血清（浆）脂类及脂蛋白测定.ppt

* 血清（浆）脂类及脂蛋白测定 ——董雷鸣 血脂的组成： 甘油三酯(少量甘油二酯和甘油一酯) 磷脂 胆固醇和胆固醇酯 非酯化脂肪酸（游离脂肪酸）等 血脂的运输形式—脂蛋白 1、定义： 指血浆脂质与载脂蛋白组成的可溶性的生物大分子。 磷脂 胆固醇 载脂蛋白 甘油三酯 胆固醇酯 2、结构： 脂蛋白微粒 表面 核心 3、分类 (1)按密度不同 HDL LDL IDL VLDL CM (2)按电泳时区带的泳动位置不同 CM HDL VLDL LDL CM β-LP 前β-LP α -LP ＋ α -LP 前β-LP β-LP CM 临床血脂测定的常见项目： 实验51： 磷钨酸-镁沉淀法测定高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C） 提取HDL 测定胆固醇 实验原理： 超速离心法 层析法 电泳法 ☆沉淀法 提取HDL的方法： 沉淀法原理： ApoB + 多阴离子化合物 沉淀↓ 硫酸葡聚糖--Mg2+ 肝素--Mn2+ 磷钨酸--Mg2+ 多阴离子（polyanion）化合物 过氧化物酶 胆固醇 + O2 胆甾烯酮 + H2O2 H2O2 + 酚 + 4-氨基安替比林 亚胺醌 + H2O 胆固醇测定（酶法）： 试剂： 沉淀剂 酶试剂 参考血清（TC测定用的定值血清） 操作步骤： 取血清和沉淀剂各200μl，充分混匀，置室温放置10min后，2500r/min，15min，吸取上清液按表进行操作。 1、提取HDL 2000 2000 2000 酶试剂 — — 50 蒸馏水 — 50 — 参考血清 50 — — 上清液 测定管 标准管 空白管 加入物(μl) 混匀，37℃水浴15min；空白管调零，0.5cm比色杯，500nm比色。 2、测定胆固醇 计算： 参考值： HDL-C (mmol/L) 测定管吸光度 标准管吸光度 × = 定值血清胆固醇浓度 5.17 0.9~2.0mmol/L 2 注意事项： 1、血清标本要及时测定 ——（在室温条件下，各型脂蛋白之间会发生脂质交换）； ——（游离的胆固醇会不断酯化）。 2、离心过程中防止温度过高（室温15~25℃），离心后放置时间不能过长。 ——（温度过高使沉淀不完全）。 临床意义： 具有抗动脉粥样硬化作用，是冠心病的保护因素。 磷酸甘油氧化法测定血清甘油三酯（TG） 实验49： 甘油三酯(TG)的结构： 甘油三酯测定的方法： 化学法 酶法 化学法 （KOH） （过碘酸） 皂化 氧化 抽提 甘油 甲醛 显色 *