无菌检查法药品无菌检查规程.doc

德信诚培训网 更多免费资料下载请进：HYPERLINK / 好好学习社区 无菌检查法药品无菌检查规程 一、目 的：阐述无菌检查规程。 二、适用范围：适用于无菌检查规程。 三、责 任 者：品控部。 四、正 文： 1 概述 无菌检查是检查药品、敷料、缝合线、无菌器具及适用于中国兽药典要求无菌检查的其它品种是否染有活菌的一种方法。无菌检查的操作环境和全部过程应严格遵守无菌操作。 该检查法根据供试品有无抑菌作用而采用薄膜过滤法或直接接种法两种方式。 2 仪器、设备和用具 2.1 无菌室分无菌操作室和缓冲间。在缓冲间应有洗手盆、毛巾、无菌衣裤放置架及挂钩、拖鞋等。无菌操作室应具有空气除菌过滤的单向流空气装置，局部洁净度100级或放置同等级别的超净工作台，室内温控(25±2)℃及除湿装置。缓冲间及操作室内均设置能达到空气消毒的紫外灯和照明灯，操作室或工作台应保持正压。 2.1.1 无菌室应每周和每次操作前用0.1%新洁尔灭或2%甲酚液或其他适宜消毒液擦拭操作台及可能污染的死角，开动无菌空气过滤器及紫外灯杀菌半小时。在每次操作完毕，同样上述消毒溶液擦拭工作台面，除去室内湿气，用紫外灯杀菌半小时。 2.1.2 无菌室的无菌程度检查无菌室在消毒处理后，无菌试验前及操作过程中需检查空气中菌落数；取直径约90mm双碟，在接种室内点燃乙醇灯，在乙醇灯旁，以无菌操作，将双碟半开注入溶化的营养琼脂培养基约20ml，制成平板，在30～35℃培养48小时，取出检查，100级清洁度要求:3个平板上生长的菌落数平均不得超过1 无菌操作台面或超净工作台应定期请有关部门检测其洁净度，应达到100级(一般用尘埃粒子计数仪)检测尘埃粒径≤5μm的粒数不得超过3.5个/升；空气流量应控制在0.75～1.0m3/S；细菌菌落数平均＜1个，可根据无菌状况必要时置换过滤器。 2.3 恒温培养箱及可调20～25℃ 2.4 离心机、显微镜、蒸汽灭菌器、标准PH比色器(0.02%酚磺酞指示液和溴钾酚蓝指示液)、恒温烤箱。 2.5 玻璃器皿 试管、量筒、三角瓶、移液管、刻度吸管(1、5、10ml)、注射器(2、5、10ml)、双碟等，用玻璃洗涤剂或清洁液浸泡，水洗3次。使用过后如与细菌接触，应先灭菌倒出内容物后再清洗，晾干。凡无菌操作过程中所用的器皿，都应用牛皮纸包扎严密，121℃灭菌30分钟，或置于耐热容器中盖妥160℃干热灭菌 2.5.1 移液管、刻度吸管在管口上端内，松松地塞少许棉花，然后放于吸管筒内或牛皮纸袋内，盖严，灭菌备用。 2.5.2 试管、离心管、三角瓶等在管(瓶)口塞上海棉胶专用塞或纱布棉塞，塞子应塞进管口内2/3之处，用牛皮纸将管口(包括塞子)包扎严，灭菌备用。 2.5.3 将注射器、针头(9号、11号、12号)配对，检查针头是否畅通后，将注射芯、管和针头分别放在双层纱布(或布)内，包扎严密，置带盖容器(瓷盘或铝制饭盒)内，盖严，用牛皮纸包扎后，灭菌备用。 2.6 无菌衣、裤、帽、口罩等洗净晾干，配套，用牛皮纸包严，灭菌备用或用一次性的无菌物品代替。 2.7 长柄取样匙，放于长的玻璃筒内(或不锈钢长筒内)，盖严，干热灭菌备用。 2.8 微孔滤膜直径50mm、孔径0.45μm。购得一批滤膜，需进行孔径大小的测试，一般有三种方法，选其中一种方法即可。 气泡法 先将滤膜浸入水中，使完全湿润，然后用镊子夹住一片滤膜放于气泡点测定装置或滤膜孔径测定仪上，膜上放一块与滤膜大小相同的尼龙筛网，再加上多孔板，将螺旋固定圈旋紧，在多孔板上加3～5mm深的水(注意排除气泡)关闭放气阀，启动空压机或氮气瓶阀，使压力缓缓上升，注意观察水面上产生第一个气泡时，记录压力表的压力，气泡点压力不应小于2.2kg/cm2(0.2MPa) 水流量法 将滤膜装于除菌滤器上，开动真空泵，压力在700mmHg(93kPa)下，抽滤已滤清的水约500ml，计算出每1min的滤速。1995年版中国兽药药典对滤膜的滤速明确规定，而USP(XXⅢ)规定在700mmHg(93kPa)压力下，滤膜直径47mm；流速55～75ml/min。 细菌过滤法 常用的细菌为粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens CMCC(B)41002)，将该菌的新鲜营养琼脂斜面培养物，接种于营养肉汤培养基中，30～35℃培养18～20小时，用无菌0.9%氯化钠溶液稀释至10－3（约相当于7×105CFU/ml），取此菌液1ml加至50ml无菌0.9%氯化钠溶液中，按薄膜过滤法过滤，取该滤液5ml接种于营养肉汤培养基40ml中，30～35℃培养24小时，应无菌生长。不符合规定的滤膜不得使用。 2.9 除菌滤器 目前有多种滤器；如STV2型无菌检查薄膜器及封闭式滤器的准