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第 2 讲 微生物的培养与应用;1.培养基类型 ;用
途;【特别提醒】
①加入培养基中的凝固剂(如琼脂),一般不能被微生物利用,只起到凝固作用。
②选择培养基一般只生长具有特定目的的微生物,鉴别培养基可以存在其他微生物,而且能鉴别特定的微生物。 ;2.配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤及注意事项
(1)步骤:计算→称量→溶化→灭菌→倒平板
(2)注意事项:①倒平板的温度一般在50℃左右适宜,温度过高会烫手,过低培养基又会凝固。②平板需倒置,这样既可使培养基表面的水分更好地挥发,又可防止皿盖上的水珠落入培养基,造成污染。 ;3.纯化大肠杆菌的操作过程及注意事项
(1)原理:在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞,使其长成单个的菌落,这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。
(2)方法:平板划线法、稀释涂布平板法。
①平板划线法:平板划线法中细胞的??离和稀释过程发生在接种环在固体平板表面上的移动划线过程中。在线的开始部分,微生物往往连在一起生长,随着线的延伸,菌数逐渐减少,最后可能形成纯种的单个菌落。(如下图) ;几种划线方法示意图
注意 ①第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环灭菌。②灼烧接种环之后,要冷却后才能伸入菌液,以免温度太高杀死菌种。③划线时最后一区域不要与第一区域相连。④划线用力大小要适当,防止用力过大将培养基划破。
②稀释涂布平板法;Ⅰ.系列稀释操作(图1)
A.将分别盛有9 mL水的6支试管灭菌,并按101~106的顺序编号。
B.用移液管吸取1 mL培养的菌液,注入101倍稀释的试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头,吹吸3次,使菌液与水充分混匀。
C.从101倍稀释的试管中吸取1 mL稀释液,注入102倍稀释的试管中,重复b步混匀操作。以此类推,直到完成最后1支试管的稀释。 ;注意 移液管需要经过灭菌。操作时,试管口和移液管应在离火焰1~2 cm处。 ;Ⅱ.涂布平板操作如图2所示 ;注意 稀释涂布平板操作复杂,各个细节均应保证“无菌”。具体如下:①酒精灯与培养皿的距离要合适;②吸管头不要接触任何其他物体;③吸管要在酒精灯火焰周围使用。 ;【对位训练】
1.有关培养基配制原则的表述正确的是
A.任何培养基都必须含有碳源、氮源、矿质元素、水
B.碳源和氮源必须具有一定比例,碳元素的含量最多,其次为氮元素
C.微生物的生长除受营养因素影响外,还受到pH、氧、渗透压的影响
D.营养物质的浓度越高越好
答案 C;2.(2012·合肥二模)用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时
①可以用相同的培养基 ②都需要使用接种针进行接种 ③都需要在火焰旁进行接种 ④都可以用来计数活菌
A.①② B.③④
C.①③ D.②④ ;解析 平板划线法或稀释涂布平板法都使用固体培养基,故①正确;平板划线法采用接种针进行操作,而稀释涂布平板法采用涂布器进行操作,故②错误;纯化时,要进行无菌操作,需要在火焰旁接种,避免空气中的微生物混入培养基,故③正确;平板划线法一般用于分离而不是计数,故④错误。
答案 C;1.筛选原理
配制选择培养基,把尿素作为培养基中的惟一氮源,原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长,其他微生物则不能在此培养基上生长。 ;2.统计菌落数目
(1)理论依据:当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确,一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。
(2)计算方法;每克样品中的菌株数=(C÷V)×M
其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数:V代表涂布平板时所用稀释液的体积(mL);M代表稀释倍数。 ;【对位训练】
3.下列关于微生物分离和培养的有关叙述,错误的是
A.微生物培养前,需对培养基进行消毒
B.测定土壤样品中的细菌数目,常用菌落计数法
C.分离土壤中不同的微生物,要采用不同的稀释度
D.分离能分解尿素的细菌,要以尿素作为培养基中唯一的氮源
解析 微生物培养前,需对培养基进行灭菌处理。
答案 A ;4.(2012·北京海淀期中)通过实验测定土壤中的细菌数量,下列与此操作有关的叙述中,不正确的是
A.用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基,经高温、高压灭菌后倒平板
B.取104、105、106倍的土壤稀释液0.1 mL,分别涂布于各组平板上
C.将培养皿倒置,37 ℃恒温培养24~48小时
D.选择菌落数在300个以上的培养皿进行计数 ;解析 检测土壤中细菌总数,用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基,经高温、高压灭菌后倒平板;取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL,分别涂布于各组平板上;将实验组和对照组平板倒置,37℃恒温培养24~48小
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