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HPLC 法测定地特胰岛素有关物质及主要杂质鉴别 *辛中帅，丁晓丽，任雪，张慧，梁成 HPLC 法测定地特胰岛素有关物质及主要杂质鉴别 * 辛中帅，丁晓丽，任雪，张慧，梁成罡＊＊ ( 中国食品药品检定研究院，北京 100050) 摘要 目的: 探索和建立地特胰岛素的纯度分析测定方法，并对主要杂质进行鉴别。方法: 采用 ＲP － HPLC 方法分离分析地 － 1 特胰岛素的有关物质，使用 Protronavi C4 色谱柱( 250 mm × 4. 6 mm，5 μm，300 ) ，流动相 A 为 0. 2 mol·L 硫酸钠缓冲液( pH 2. 3) － 乙腈( 82∶ 18) ，流动相 B 为水 － 乙腈( 40∶ 60) ，洗脱梯度( 0 min，35% B; 45 min，67% B; 65 min，67% B; 66 min，35% B; 80 min，35% B) ，流速 1. 0 mL·min － 1 ，检测波长 214 nm，柱温 45 ℃ 。同时收集该色谱条件下的最大杂质组分，利用 LC － MS / MS 方法进行鉴别。液质条件为: 液相色谱分离采用 Acquity UPLC BEH300 C18 柱 ( 2. 1 mm × 100 mm，1. 7 μm) ，流 动 相 A 为 含 0. 1% 甲酸的水溶液，流动相 B 为含 0. 1% 甲酸的乙腈溶液，30 min 内 B 相由 5% 升至 30% ，流速为 300 nL·min － 1 ，洗脱时间为 30 min。质谱离子源为纳升级电喷雾离子源，采用正离子模式检测。结果: 建立的 ＲP － HPLC 纯度分析方法具有良好的方法 学验证结果，能准确测定样品中的有关物质; LC － MS / MS 鉴定了地特胰岛素中的最大杂质为 A 链第 21 位天冬酰胺的脱氨产 物。结论: 建立的 ＲP － HPLC 和 LC － MS / MS 方法可准确有效地对地特胰岛素有关物质进行定量测定和鉴别分析，可作为地 特胰岛素的质量研究和质控分析方法。 关键词: 地特胰岛素; 纯度; 有关物质; 杂质鉴别; 脱氨天冬酰胺; 反相高效液相色谱; 液相色谱 － 质谱联用 中图分类号: Ｒ917 文献标识码: A 文章编号: 0254 － 1793( 2014) 08 － 1497 － 07 HPLC determination of related substances and identification of main impurity in insulin detemir* XIN Zhong － shuai，DING Xiao － li，ＲEN Xue，ZHANG Hui，LIANG Cheng － gang＊＊ ( National Institutes for Food and Drug Control，Beijing 100050，China) Abstract Objective: To explore and establish a method for determination of purity of insulin detemir and to identi- fy the main impurity． Methods: The related substances in insulin detemir were separated and analyzed by ＲP － － 1 HPLC． The column was Protronavi C4 ( 250 mm × 4. 6 mm，5 μm，300 ) ; the mobile phase A was 0. 2 mol·L so- dium sulphate buffer ( pH 2. 3) － acetonitrile ( 82∶ 18) ; the mobile phase B was water － acetonitrile ( 40∶ 60) with gradient elution ( 0 min，35% B; 45 min，67% B; 65 min，67% B; 66 min，35% B; 80 min，35% B) ． The flow rate was 1. 0 mL·min － 1 ; the detection wavelength was set at 214 nm; the column temperature was 45 ℃ ． Chromatographic separation was achieved on an Acquity UPLC BEH300 C18 column ( 2. 1 mm × 100 mm，1.