GB/T 36757-2018M-MLV反转录酶.pdf

ICS 07.080 C 27 国 中华人民共和国国家标准 GB/T 36757-2018 M-MLV 反转录酶 M－岛1LV reverse transcriptase 2018-09-17 发布 2019-04-01 实施 国家市场监督管理总局峪非 中国国家标准化管理委员会 0(.. I (J GB/ T 36757-2018 目 次 皿 引言 ……………………………………………………………………………………………… .. . ］＿~「 1 范围 － 2 规范性引用文件 － 3 术语和定义 · 4 技术要求 － 5 检验方法 …· 6 包装、运输及贮存………………………………………………………………………………………… 2 7 保质期 ……………………………………………………………………………………………·… 2 附录A （规范性附录） M-MLV 反转录隅隅活力检测 附录B （规范性附录） 核酸外切陪检测 附录c （规范性附录） 核酸内t1J 陌检测 I GB/ T 36757-20 18 附 录 B （规范性附录） 核酸外切酶检测 B.1 原理 由于BamH I 切开DNA 双链产生一对勃性末端，其各有 5 个碱基失去互补碱基形成突内单链，它 易受核酸外切酶作用丢失若干个碱基乃至形成平末端；如果将此DNA 连接后再用 BamH I 酶切，结果 是无法切开。 如果该位点是在外显子区或编码区，即意味其对应的氨基酸序列发生变化，乃至某些生物 性状发生改变。 例如质粒pBR322 所含BamH I 识别位点是在其抗匹｜环素基因上，如果使用被核酸外 切酶污染的样品 BamH I 过量长时程切荆 pBR322 ，然后再连接闭环后重新转化受体菌，该菌在含四环 素培养基上无法生长，而没有这样陪切的 pBR322 转化菌能够生长。 又如质粒 pUC19 所含BamH I 位 点居于编码 Lac Z 的 α 互补肤上，若发生前述状况， 就会导致该肤链的氨基酸序列变化，最终在含异丙 半乳糖节’ （IPTG）和冉半乳糖节酶的 LB 培养基土由原本是蓝斑变成向斑。 如果向斑数目占到 基硫代 总菌斑数的10 %以上，就判定该样品已有核酸外切酶污染。 B.2 仪器和设备 B. 2. 1 恒泪水浴槽。 B.2.2 台式离心机。 B.2.3 届净丁，作台。 B. 2.4 恒泪培养箱。 B. 3 材料 B. 3. 1 高纯 CCC pUC19 DNA。 B. 3.2 T 4 DNA 连接隅。 B. 3.3 10 × T 4 DNA 连接陌缓冲液： 500 mmol/L Tri日’HCl 缓冲液（pH7. 肘， 100 mmo l/L Mgz+ , 10 mmol/L AT P, 100 mmo l/L DTTO B.3.4 LB 培养液。 B. 3.5 氯仿－异戊醇（ 24 :