GB/T 18637-2018牛病毒性腹泻/粘膜病诊断技术规范.pdf

ICS 11.220 B 41 国 中华人民共和国国家标准 G~/ T 18637-2018 代替 GB/T 18637 2002 牛病毒性腹泻／粘膜病诊断技术规范 Technical specifications for diagnosis of bovine viral diarrhea / mucosal disease 2018-09-17 发布 2019-04-01 实施 国家市场监督管理总局峪非 中国国家标准化管理委员会 0(.. I (J GB/T 18637-20 18 目IJ l§j 本标准按照 GB/T 1. 1-2009 给出的规则起草。 本标准代替GB/T 18637-2002 《牛病毒性腹泻／粘膜病诊断技术》，除编辑性修改外， 主要技术变 化女II 下： 增加了“临床诊断”方法（见第 4 章） ； －一增加了“实时荧光 RT-PCR 检测”（见 5.4 ） 。 本标准由中华人民共和国农业农村部提出。 本标准由全国动物卫生标准化技术委员会（SAC/TC 1 81 ）归口。 本标准起草单位：中国兽医药品监察所、中华人民共和国北京出入境检验检疫局、扬州大学、中华人 民共和国宁夏出入境检验检疫局、中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中国动物卫生与流行病学 中心。 本标准主要起草人： 李俊平、刘环、印春生、陶洁、郝俊虎、蒲静、范学政、吴华伟、孙森、王建华、 宋建德、朱国强。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： - GB/T 18637 2002 0 I GB/T 18637-2018 5.3.2 耗材 同 5. 2.2 0 5.3.3 试剂 同 5. 2 . 3 0 5.3.4 试验步骤 5.3.4.1 定量测定 5.3.4. 1. 1 用多道移液器于 96 孔细胞培养板中加入稀释掖（元血清的 MEM) ,50 µL／孔。 5.3.4. 1.2 用单道移液器取50 /.tL 经 56。C 30 min 灭活后的被检血泊于2 块细胞板的第一排孔中，每份 样品每块板加4 孔。 5.3.4. 1.3 用多道移被器（调至 50 µL）从第一排孔开始连续作倍比稀释， 直至最后一个孔，并从最后一 排的孔中弃去 50 µL 稀释液。 5.3.4. 1.4 用稀释掖将BVDV-1 ( Oregon C24V 株）和 BVDV-2(890 株）病毒液分别稀释成 1 00 TCID,o/ 50 µL 的工作液。 5.3.4. 1.5 第一块板用多道移液器从第二排孔开始每孔加 BVDV-1 ( Oregon C24V 株）病毒工作液 50 µL，第一排孔加 50 µL 稀释被作为被检血清毒性对照，同时设 1 : 10 稀释的 BVDV-1 阳性血清对 照、1 : 5 稀释的阴性血清对照和正常细胞对照各 4 孔及 BVDV-1 (Or egon C24V 株）病毒液回归对照 10° ~ 10 3 的 4 个稀释度， 每个稀释度各4 孔。 第二块板用多道移液器从第二排孔开始每孔加 BVDV-2 ( 890 株）病毒工作液 50 µL，第一排孔加 50 µL 稀释液作为被检血清毒性对照， 同时设 1 : 10 稀释的 BVDV-2 阳性血清对照、1 : 5 稀辞的阴性血消对照和正常细胞对照各 4 孔及 BVDV-