课件：不明原因肺炎病例的实验室诊断.ppt

* * * 四、不明原因肺炎的实验室检测 1、经典检测方法 病毒分离与鉴定：不适用常规检测，用于科研和疑难病例鉴定。 SARS-CoV：接种人胚肺细胞或猴肾细胞培养分离病毒，再用补体结合试验或中和试验、IFA或ELISA等鉴定抗原。 禽流感：用SPF鸡胚单腔法和MDCK组织细胞分离培养，培养物用血凝试验（HA）和H5血凝抑制试验（HI）鉴定。 微量血清中和实验:H5活病毒，必须在BSL-3级实验室里操作。 （具体操作参见国标《流行性感冒诊断标准及处理原则》） * 四、不明原因肺炎的实验室检测 2、快速检测方法 1）分子生物学检测：RT-PCR或Real-Time PCR SARS-CoV核酸检测 禽H5亚型流感病毒核酸检测 2）检测抗原的快速诊断试剂盒：敏感性较低，只能检测型特异性抗原。 3）免疫荧光测定 * 四、不明原因肺炎的实验室检测 SARS-CoV核酸检测试剂 首选国家推荐使用的试剂： 深圳匹基的SARS-CoV Real-time PCR检测试剂。 中大达安基因的SARS-CoV Real-time PCR检测试剂。 如果有条件，可以使用以下核酸检测试剂： 美国CDC研制SARS-CoV Real-time PCR核酸检测试剂。 德国罗氏RT-PCR核酸检测试剂，结果必须要测序。 德国Artus的SARS-CoV Real-time PCR核酸检测试剂。 * 四、不明原因肺炎的实验室检测 SARS检测结果的确认 应用PCR方法，符合下列三项之一者判断为阳性： 同一份临床标本在两个检测实验室使用两种不同的方法，或重复PCR方法检测阳性； 至少两个不同部位的标本（如咽拭和粪便）检测阳性； 不同病程（至少间隔2天）采集的同一种标本（如两份或多份咽拭）检测阳性； 平行检测进展期和恢复期的血清抗体，发生阳转或4倍以上升高，可做出SARS-CoV感染的实验室检测报告。 * 四、不明原因肺炎的实验室检测 禽H5亚型流感病毒核酸检测试剂 用于禽H5亚型流感病毒快速检测、测序及排除； 建议使用中国流感中心或WHO等权威部门推荐的引物和探针； 建议使用德国QIAGEN的Rneasy Mini Kit (病毒核酸提取)和QIAquick Gel Extraction Kit(PCR产物纯化)产品。（源于《禽流感实验室检测技术方案》） * 四、不明原因肺炎的实验室检测 以下情况的禽流感疑似病例原始标本及分离物送国家流感中心检测、复核、确认： 分离物HA（+），同时HI（-），H5的RT-PCR检测阳性； 分离物HA（+），同时HI（+）或H5的RT-PCR检测阳性； 分离物HA（+），同时H5的RT-PCR检测阳性; 病人恢复期血清比急性期H5抗体有4倍或以上增高; 标本分离阳性，HI（-），并已排除当前流行甲、乙型毒株的可能。 （HA--血凝实验;HI--H5血凝抑制试验） * 四、不明原因肺炎的实验室检测 3、血清学试验 SARS-CoV抗体：包括IgG、IgM或总抗体，任何一种抗体发生阳转或4倍及以上升高，均可诊断SARS。因IgG抗体持续时间较长，最好检测IgG抗体。 禽流感病毒抗体：采集急性期和恢复期的双份血清同步检测。恢复期抗体滴度增高4倍或以上判断为阳性。 其他抗体：有条件的单位首先要做支原体、衣原体、HIV、RSV、腺病毒、流感病毒、军团菌等的排查检测。 * 四、不明原因肺炎的实验室检测 SARS-CoV抗体检测试剂 首选国家推荐使用的试剂： 北京华大吉比爱公司的SARS-CoV IgM/IgG抗体ELISA检测试剂盒。 军事医学科学院的SARS-CoV IgM/IgG抗体IFA检测试剂盒。 如果有条件，可以使用以下抗体检测试剂： 欧盟（EuroImmunon）研制的SARS-CoV IgM/IgG抗体IFA检测试剂盒。 香港大学研制的SARS-CoV IgM/IgG抗体IFA检测试剂盒。 （源于《广东省传染性非典型肺炎实验室检测工作指引（试行）》） * 四、不明原因肺炎的实验室检测 4、常规实验室检测项目 外周血象：外周血白细胞计数（WBC）正常或降低，淋巴细胞计数绝对值减少，并呈逐步减低趋势。 T淋巴细胞亚群：大多数SARS患者外周血CD3＋、CD4＋、CD8＋T淋巴细胞亚群减低，尤以CD4＋减低明显；CD4＋/CD8＋比值正常或减低。大部分禽流感患者CD4＋/CD8＋比值倒置。 低氧血症：SARS患者动脉血血氧饱和度和氧分压都有不同程度下降，下降程度与病情严重程度密切相关。（ WHO也报告，SARS的典型临床改变就是发热、肺部实变、血氧饱和度和氧分压下降。） 其他：多数患者表现有肝功能和LD、CK的异常，并伴有电解质代谢紊