01章-细菌的基本检验技术.pptVIP

生化反应(biochemical reaction) 　　 不同种类的细菌具有不同的酶系统，因而对底物的分解能力各异，其代谢产物也不尽相同。利用生物化学的方法直接或间接地测定细菌的代谢产物，从而鉴别细菌的反应称为细菌的生化反应 (biochemical reaction) 或生物化学试验（biochemical test） 一、碳水化合物代谢试验 1．糖（醇、苷）类发酵试验 (1)原理 由于细菌含有发酵不同糖类的酶，故分解糖的能力不同，终末产物亦不一致。有的能分解，有的仅能分解1、2种，还有的不能分解。有的产酸产气，有的仅产酸，故可利用鉴别细菌 (2)培养基 在培养基中加入0．5％-1％的糖类(单糖、双糖或多糖)、醇类(甘露醇、肌醇等)、苷类(水杨苷等)。可为液体、半固体、固体或微量生化管几种类型 一、碳水化合物代谢试验 (3)应用 是细菌生化试验中最主要和最基本的试验，特别是对肠杆菌科细菌的鉴定尤为重要。如大肠埃希菌可发酵葡萄糖及乳糖，沙门菌属只能发酵葡萄糖，不发酵乳糖；即使两种细菌均可发酵同一种糖类，所产生的代谢产物也不尽相同，如大肠埃希菌和志贺菌属均可发酵葡萄糖，但前者产酸、产气，而后者仅产酸 一、碳水化合物代谢试验 2．氧化–发酵试验（O–F试验） （1）原理 细菌在分解葡萄糖的过程中，必须有分子氧参加的称为氧化型。细菌在分解葡萄糖的过程中，可以进行无氧降解的称为发酵型。不分解葡萄糖的称为产碱型 （2）培养基 Hugh–Leifson培养基 （3）应用 用于细菌种属间的鉴别 一、碳水化合物代谢试验 3．β–半乳糖苷酶试验（ONPG试验） （1）原理 有些细菌产生β–半乳糖苷酶，可分解邻–硝基酚–β–D–半乳糖苷（O–nitrophenyl–β–D–galactopyranoside，ONPG）。ONPG为无色，经β–半乳糖苷酶水解后，可生成黄色的邻–硝基酚（O–nitrophenol） （2）试剂 0．75mol/L ONPG溶液 （3）应用 主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定 4．七叶苷水解试验 （1）原理 某些细菌能水解七叶苷生成葡萄糖和七叶素，后者与培养基中的二价铁离子或铅离子结合形成黑色化合物，使培养基呈现黑色 （2）培养基 七叶苷培养基、胆汁七叶苷培养基 （3）应用 主要用于鉴别D群链球菌与其他链球菌 5．甲基红试验 (1)原理 某些细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，进一步分解，产生甲酸等，使pH降至4．5以下，加入甲基红试剂则呈红色为阳性。若分解葡萄糖产酸量少，则pH 6．2以上，故加入甲基红指示剂呈黄色，为阴性 (2)培养基 葡萄糖蛋白胨水培养基 (3)应用 主要用于大肠埃希菌和产气肠杆菌的 鉴别，前者为阳性，后者为阴性 6．V-P试验 (1)原理 某些细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，脱羧产生乙酰甲基甲醇，在碱性环境中被氧氧化为二乙酰，进而与胍基起作用生成红色化合物，则为V-P试验阳性 (2)培养基 葡萄糖蛋白胨水培养基 (3)应用 常与甲基红试验联合应用,因为前者为阳性的细菌，后者通常为阴性 二、 蛋白质和氨基酸代谢试验 细菌分解蛋白质的酶类有两类： 蛋白酶 胞外酶，能分解蛋白质为多肽或二肽，有时可形成少量氨基酸 肽酶 胞内酶，能水解肽类为游离氨基酸 1．吲哚试验 （1）原理 有些细菌具有色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚（indole），吲哚与对二甲氨基苯甲醛作用，形成红色的玫瑰吲哚 （2）培养基 蛋白胨水培养基 （3）应用 主要用于肠杆菌科细菌的鉴定 2．硫化氢试验 （1）原理 某些细菌能分解培养基中的胱氨酸、半胱氨酸等含硫氨基酸，生成硫化氢，与铅或亚铁离子生成黑色硫化物 （2）培养基 醋酸铅培养基或克氏双糖铁或三糖铁琼脂培养基（ KIA 、TSI琼脂） （3）应用 主要用于肠杆菌科的鉴别 3．尿素酶试验 （1）原理 某些细菌能产生尿素酶，分解尿素生成大量的氨，使培养基呈碱性，酚红指示剂亦随之变红 （2）培养基 尿素培养基 （3）应用 主要用于肠杆菌科中的变形杆菌属、摩根菌属和普罗威登菌属的鉴定。普通变形杆菌和奇异变形杆菌、摩根摩根菌和雷极普罗威登斯菌阳性，斯氏和产碱普罗威登菌阴性 4．苯丙氨酸脱氨酶试验 （1）原理 某些细菌可产生苯丙氨酸脱氨酶，使苯丙氨酸脱去氨基，形成苯丙酮酸和游离的氨，苯丙酮酸与三氯化铁试剂结合形成绿色化合物。若延长反应时间，会引起褪色 （2）培养基 苯丙氨酸琼脂培养基 （3）应用 本试验特异性较高，主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。变形杆菌属、摩根菌属和普罗威登菌属细菌均阳性，肠杆菌科其他细菌均阴性 5．氨基酸脱羧酶试验 （1）原理 能产生氨基酸脱羧酶的细菌，可使氨基酸脱去羧基，生成胺和CO2。虽然不同细菌产生的脱羧酶种类