SOP-M-31106-动物源性食品中盐酸克伦特罗、沙丁胺醇与莱克多巴胺残留量的测定-GC-MS法.docVIP

PAGE PAGE 4 重庆出入境检验检疫局检验检疫技术中心 Inspection Quarantine Technical Center of Chongqing CIQ 标准操作程序 Standard Operation Procedure 动物源性食品中盐酸克伦特罗、沙丁胺醇 和莱克多巴胺残留量的测定——气质联用法 文件编号 SOP-M-31106 受控状态 发放编号 持有人 SOP-M-31106 动物源性食品中盐酸克伦特罗、沙丁胺醇 和莱克多巴胺残留量的测定 —— GC-MS法 1、方法的适用范围和运用 该方法适用于动物源性食品中的盐酸克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺残留量的检测，检测限均为 0.5 ug/kg。 2、原理 样品均质后用盐酸葡萄糖醛甙酶/芳基硫酯酶在pH=5.2的缓冲液中消化后，离心分离过滤，滤液用固相萃取法净化，再经BSTFA衍生化反应后，用GC-MS测定。 3、方法来源 该方法依据国家质量监督检验检疫总局《动物和动物源食品中兽药残留分析方法》中的香港政府化验所方法：GC-MS法测定动物毛发、尿液及组织中的克喘素及舒喘宁残留量，以及GB/T5009.192-2003等编写。 4、试剂和溶液 4.1 试剂 4.1.1 甲醇 ：分析纯。 4.1.2 盐酸葡萄糖醛甙酶/芳基硫酯酶。 4.1.3 盐酸：分析纯。 4.1.4 双-（三甲基硅烷基）-三氟乙酸（BSTFA）。 4.1.5 甲苯：分析纯。 4.1.6 乙酸铵：分析纯。 4.1.7 乙酸：分析纯。 4.1.8 氨水：分析纯（比重0.88）。 4.2溶液 4.2.1 0.02mol/L乙酸铵溶液（PH=5.2）：溶解1.45克乙酸铵于500~700mL水中，用乙酸调整PH值为5.2，并稀释到1L。 4.2.2 0.03mol/L盐酸：取30mL1mol/L的盐酸溶液用水稀释到1L。 4.2.3 4%氨化甲醇：取4mL氨水用甲醇稀释到100mL。 5、标准品和标准溶液 5.1 盐酸克伦特罗，沙丁胺醇和莱克多巴胺购自Sigma，纯度大于98%。 5.2 标准储备液：（1000mg/mL） 称取盐酸克伦特罗114 mg，沙丁胺醇100 mg和莱克多巴胺100 mg分别溶于100 mL甲醇中。在冰箱中避光保存，有效期一年。 5.3 混合标准溶液：（30μg/mL） 分别移取标准储备液（5.2）3.00mL，用甲醇定容至100 mL。冰箱中避光保存，有效期半年。 5.4 标准工作溶液：（0.3μg/mL） 移取混合标准溶液 （5.3）1.00 mL，用甲醇定容至100 mL。冰箱中避光保存，有效期：2周。 6、仪器设备 6.1 仪器 6.1.1 离心机：4000rpm 德国HERMLE Z323K （SOP-E-31115） 6.1.2 螺口盖离心管：50 mL 6.1.3 SEP-PAK真空接头。 6.1.4 聚四氟乙烯螺口试管：5.0 mL 6.1.5 均质器 JJ-2 6.1.6 固相萃取装置或全自动固相萃取仪（SOP-E-31122） 6.1.7 无油真空泵 GAST DOA-P504-BN 6.1.8 旋涡混合器 XW-80A 6.1.9 超声波振荡器 AS20500B 6.1.10 恒温箱：范围100℃，控温精度±3℃ BINDER FD115（SOP-E-31105） 6.1.11 SPE柱LC-18 500mg，3mL 6.1.12 SPE柱LC-SCX 500mg，3mL 6.1.13 天平 SARTORIUS A200S（ SOP-E-31103） 6.1.14 氮吹仪 N-EVAP111（SOP-E-31120） 6.2 分析仪器 QP5050A气相色谱-质谱联用仪（岛津公司SOP-E-31140） 7、操作步骤 7.1 样品处理 7.1.1 称取10±0.1g均质的组织样品于试管中，加入20mL乙酸铵缓冲液（4.2.1），加盖后在旋涡混合器上混合5分钟。 7.1.2 加入50μL盐酸葡萄糖醛甙酶/芳基硫酯酶溶液，加盖后超声波振荡15分钟。 7.1.3 于恒温箱中37℃培养18小时。 7.1.4 以3000 rpm离心5分钟，过滤上清液于干净试管中，作为待净化液。 7.2 净化 7.2.1 安装固相萃取装置（或全自动固相萃取仪SOP-E程）：用真空接头将真空泵和固相萃取装置连接好。将C18小柱和SCX小柱按从上到下的次序装好。依次用5mL水、5mL甲醇和5mL盐酸溶液以一定的流速活化柱子。 7.2.2 将5mL样品待净化液加到C18小柱中。 7.2.3 依次用5mL水、5mL甲醇淋洗柱子。 7.2.4 在全部溶剂流过柱子后，保持抽气5min，使柱中液体枯竭。 7.2.5 取下C18小柱，用5mL氨化甲醇淋洗