课件：肿瘤诊断.ppt

■PCR-SSCP法（PCR-单链构型多态性检测） 利用基因突变后，其单链DNA的二级结构发生改变，这样在非变性 聚丙酰胺凝胶（5～6%）电泳时会出现迁移率改变。 ■荧光共振能量转移探针结合融合曲线分析 （Fluorescence Resonance Energy Transfer , FRET） 检测探针与靶DNA杂交后，根据杂交结合物的解链温度（Tm）的 差异进行基因点突变的实时监测。并结合荧光融合曲线分析，提高点突 变的检测分辨率。 Mutation probe anchor probe probe anchor probe Mutation 52℃ 50℃ 52℃ ■DNA序列分析（ DNA sequencing） 利用双脱氧终止法进行碱基序列分析。 肿瘤DNA的核苷酸序列测定后，再与正常DNA序列进行比较，以 确定突变的类型和突变的位置。 （2）基因缺失、易位检测（Gene loses translocation） 基因缺失、易位指伴有大片段DNA缺失和易位。 染色体染色分析 染色体分析 荧光原位杂交 比较基因组杂交 （Analysis of chromosome） ■染色体Giemsa染色分析 采集新鲜的肿瘤组织，经短期培 养后用秋水仙素处理，使细胞停留在 有丝分裂中期，收集细胞，制片后经 10%Giemsa染色显带，进行G带分析。 【染色体核型】 单倍体、异倍体、缺失、重排、易位、倒位、插入等。 ■荧光原位杂交（Fiuorescence in situ hybridization,FISH） 荧光素标记核苷酸制被探针，通过原位杂交检测目的靶DNA 存在的一种分子检测技术。 （3）基因过表达检测（Over expression of gene） ■DNA的多拷贝检测 定量实时荧光PCR 终点法半定量免疫酶PCR方法 ■mRNA转录过量检测 FISH技术 RNA-DNA杂交技术 多拷贝检测 转录过量检测 【FISH最大的优点】 ■可以检测染色体结构异常和靶基因定位。 ■可用于新鲜组织，也可用于固定组织的石蜡包埋切片。 ■能用于有丝分裂中期细胞和间期细胞检测。 ■具有较强的特异性、稳定性和无污染。 ■表达产物检测 免疫荧光显微镜检测 免疫组织化学检测 免疫电镜检测 流式细胞（flow cytometry）仪检测 抗原抗体检测 ELISA 电化学免疫检测 时间分辨免疫荧光检测 免疫印迹检测 Normal N,N N,D H,N H,D 1,W 2,W 36%粒 33%粒 18%粒 35%粒 12%粒 29%粒 ▲ Western blot BCR-Abl p53 ?-Tubulin Control 1?M As2O3 32nM PS-341 Control 1?M As2O3 + 32nM PS-341 1?M As2O3 32nM PS-341 1?M As2O3 + 32nM PS-341 24Hr 48Hr 210kDa 53kDa 43kDa 55kDa NDRG-1 24h 48h ELISA检测仪器 （三）组学检测技术 【生物芯片技术（Technique of DNA chip）】 生物芯片或微阵列技术是指在一小片（或微粒）固相载体 上储存大量的生物信息，并形成高通量的检测技术。 生物芯片 DNA芯片（DNA chip） cDN