焦磷酸测序检测分析BRAF基因突变方法的建立.PDF

检验医学2018 年 12 月第33 卷第 12 期 Laboratory Medicine ，December 2018 ，Vol. 33 ，No. 12 ·1127 · 文章编号 ：1673-8640 （2018 ）12-1127-05 中图分类号：R446.1 文献标志码 ：A DOI ：10.3969/j.issn.1673-8640.2018.12.016 焦磷酸测序检测分析BRAF 基因突变方法的建立 1 2 周 钢 ，钟 焱 （ 1. 中南大学湘雅医院临床药理研究所，湖南长沙 410078 ； 2. 长江卫生职业学院，湖南长沙 410100 ） BRAF 摘要：目的 建立鼠类肉瘤病毒癌基因同源物B1 （ ）基因V600E （TA ）突变位点的焦磷酸测 序（PYRO ）方法。方法 提取100例结直肠癌患者的gDNA ，采用Qigene pyro24 测序仪进行BRAF基因的 PYRO ，并通过重复性试验和Sanger测序法验证方法的正确性。结果 建立了BRAF基因V600E突变位点的 PYRO方法，经重复性试验和Sanger测序验证，结果准确可靠，100例结直肠癌患者的标本中共检测出6例有基 因突变。结论 建立的BRAF基因突变的PYRO方法具有快速、简便、灵敏度和准确性高的优点，适用于科研 和临床批量检测。 关键词：焦磷酸测序；鼠类肉瘤病毒癌基因同源物B1 ；结直肠癌；基因突变 Pyro-sequencing analysis for the detection of BRAF gene mutation ZHOU Gang 1 2 ，ZHONG Yan . （1. Department of Clinical Pharmacology ，Xiangya Hospital ，Central South University，Changsha 410078 ，Hunan ， China；2. Changsha Health Vocational College，Changsha 410100 ，Hunan ，China）　　 Abstract ：Objective To establish a pyro-sequencing analysis （PYRO ） for the detection of V-raf murine BRAF sarcoma viral oncogene homolog B1 （ ） gene mutation. Methods The gDNA was extracred from 100 BRAF colorectal cancer patients tissue samples. PYRO for gene was performed through Qigene pyro24. The accuracy was validated by repeat test and Sanger sequencing. Results The PYRO for the detection of BRAF gene mutation was established. Repeat test and Sanger sequencing showed that the accuracy and reliability were good. The detected gene