放线菌的形态观察.docxVIP

山东大学 放线菌的形态观察 一、 实验口的： 1、 学会并掌握放线菌的观察方法——插片法 2、 了解放线菌的基本形态 3、 巩固显微操作技术及无菌操作技术 二、 实验原理： 1、 放线菌菌丝体由基内菌丝、气生菌丝和砲子丝组成，制片时不采取涂 片法，以免破坏细胞及菌丝体形态。通常采用插片法或玻璃纸法并结 合菌丝体简单染色进行观察。 2、 在插片法中，将灭菌盖玻片插入接有放线菌的平板，使放线菌沿盖玻 片和培养基交接处生长而依附在盖玻片上，取出盖玻片可直接在显微 镜下观察放线菌在自然生长状态下的形态特征，而且有利于同生长时 期的放线菌进行观察。 3、 高氏I号培养基是用来培养和观察放线菌形态特征的合成培养基。此 合成培养基的主要特点是含有多种化学成分已知的无机盐，这些无机 盐可能互和作用而产生沉淀。因此才混合培养基成分时，一般是按配 方的顺序依次溶解各成分，甚至有时还需要将两种或多种成分分别灭 菌，使用吋再按比例混合。此外，合成培养基有的还需要补加微量元 素，如Feo 4、 放线菌的菌落特征：干燥、不透明，表面呈紧密的丝绒状，上有一层 色彩鲜艳的干粉；菌落与培养基的连接紧密，难以挑取。其孑包子的表 面结构、形状及颜色在一定条件下比较稳定，是鉴定菌种的重要依据。 放线菌在自然界分布很广，绝大多数为腐生，少数寄生。 三、 实验仪器： 1 菌种：列氏链霉菌 2、 培养基：高氏I号培养基 3、 仪器和其他用品：载玻片、盖玻片、显微镜、银子、平皿、接种环 四、 操作步骤： 1、 配制高氏I号培养基(200mL)：按配方称取培养基组分，先用少量 冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，加热，边搅拌边加入其他成 分，溶化后，补足水分至200mL,调解pH, 121°C灭菌20分钟。 2、 倒平板:取融化并冷却的高氏I号培养基倒平板，倒平板时使培养基 厚一些，凝固待用。 3、 接种：无菌操作，用接种环挑取菌种在平板上划线，划线要密。 4、 插片：无菌操作，用银子取灭菌盖玻片以约45度角插入平板，与划 线方向垂直。 5、 培养：将平板导致，28°C培养7天。 6、 镜检：用银子小心取出盖玻片，用纸擦去一面培养物，有菌一面朝下 放在载玻片上，直接用低倍镜和高倍镜镜检，必耍时可用油镜观察。 五、实验记录: 邛氏链霉菌 六、 结果分析： 在高倍镜下观察时，基内菌丝透明且较细，气生菌丝颜色较黑且较粗。弗 氏链霉菌鞄了丝为直行，可见其上的抱了一个接一个成直行排列。 七、 注意事项： 1、在移动附有菌体的盖玻片时勿碰动菌丝体。 八、 思考题： 1、 镜检时如何区分放线菌基内菌丝、气生菌丝及砲子丝？ 答：气生菌丝直生或分枝丝状，较基内菌丝粗，是指从基质伸向空气中的 菌丝体。菌类的菌丝体多是匍匐在基质上，或是贯通基质而仲长的，为了 抱子的形成而生长气生菌丝。在一定条件下，水生菌类也可以生长气生菌 丝。真菌和放线菌的营养菌丝发育到一定时期，长出培养基外并伸向空间 的菌丝称为气生菌丝。它叠生于营养菌丝上，以致可以覆盖整个菌落表面。 在光学显微镜下，颜色较深，直径比营养菌丝粗，直形或弯曲，有的产生 色素。在固体培养基上霉菌的菌丝分化为营养菌丝和气生菌丝。营养菌丝 深入到培养基内吸收养料；气生菌丝向空中生长，有些气生菌丝发育到一 定阶段分化成繁殖菌丝，产生抱子。 附1:高氏I号培养基配方表: 可溶性淀粉 4g KN03 0.2g NaCI O.lg K2HPO4 O.lg MgS04 O.lg FeS04 0.002g 琼脂 2g 水 200mL pH 7.2-7.4 附2 附2：弗氏链霉菌 基生菌丝 气生菌丝 抱子丝