民院-检验核医学放射免疫分析和免疫放射分析.ppt

检验核医学 第六章 体外分析技术 In vitro analysis techniques 第一节 放射免疫分析 一、基本原理 1. 放射免疫分析（RIA）是利用放射性标记的抗原（ *Ag ）与非标记抗原（ Ag ）同时与限量的特异性抗体（Ab）进行可逆性竞争性免疫结合反应。 2. 标准曲线:利用一系列已知浓度的标准Ag(即标准品)与待测样品在相同条件下反应后，用放射计数仪测定*Ag –Ab(B)或游离的*Ag （F）的放射性。以各浓度点测量的相应的放射性计数（cpm）或用计算参数[ B/(B+F),B/F或B/B0]为纵坐标作图绘制标准曲线。 a) Ab和*Ag 的量恒定 b) 抗原抗体反应为可逆性 c) Ab和*Ag 的性质与结构相同 质量控制样品 质控的“标准系统”－质控血清(QC) 要求：1 QC样品与待测样品性质相同 2 QC样品与待测样品中待测物相同，免疫活性一致 3 QC样品中待测物量已知，分高、中、低三档浓度 4足量制备，分装，低温存放，分批使用 制备方法：1按三档浓度收集多余病人血清，测定标示值 2在缓冲溶液中加入无待测物的蛋白质，再溶入 三档浓度待测物标准品，测定标示值 使用方法：QC样品组数＝√待测样品总数 / 3 以组为单位在待测样品中前、中、后放置测定 质量控制指标 1灵敏度 能检测出与B0管具统计差别的最小可测量 (1)B0%-2SD的相应剂量 (2)B0%-10%的相应剂量 (3)由精密度图得出 2特异性 抗体识别其抗原的能力，用交叉反应率表示 3精密度 在相同条件下，对某一样品多次检测所得结果的 符合程度，评价随机误差 ∑( Xi – X )2 |X1 – X2| SD = ——————— n=2时，SD = ————— n – 1 √2 4偏差 测定值偏离真值的程度，评价系统误差 准确度 测定值与真值的符合程度，评价系统误差和随机误差 测定值 - 真值 偏差b = ——————— X 100% 真值 准确度 = √偏差2 + 精密度2 = √b2 + SD2 5稳定性 批间的重复性 B0%、NSB%、ED25、ED50、ED75、QC样品测定值 6临床有效性 一项分析方法完成临床目的的程度 正常值及其范围、正常值与异常值交叉范围、 诊断符合率(阳性率、阴性率、假阳性率、假阴性率) 实验室内部质量控制方法 1对实验数据进行审核剔除“坏点” 2剂量反应曲线拟合及质量审核 3精密度评价 (1)反应误差关系RER 从多批实验资料求出直线方程式 SDR = a + bR a反映分离误差 b反映加样误差 (2)精密度图(P-P图) (用剂量反应曲线) 通过RER将SDR转换SDD(CVD%) 作SDD (CVD%) - lgD曲线CVD%≤10% 4偏差与准确度评价 (1)回收实验 反映偏差 测定值-空白值 回收率% = ————— X 100% 已知值 回收率% = 100% ± 10% (2)健全性试验 用标准品和样品分别作剂量反应曲线和样品稀释曲线，两条曲线应平行 (3)二样本-Youden图 反映准确度，用QC样品 QC首-QC尾曲线，误差≤±2SD 5稳定性评价 批间质控，用QC样品 (1)Cusum图 每批QC测定值与靶值的差累计后按 批次连续作图，折线两端落差≤±5SD (2)质控图 QC测定值-批次曲线，误