肠道微生态环境与儿童过敏性疾病的关系以及参芪健脾方对肠粘膜屏障功能修复和免疫功能调整的研究中西医结合基础专业论文.docxVIP

rI r I } ㈣iilIlilll／lliiriinriilllIlllllllllul l T rI 90 1 1 20 l· l 目 录 中文摘要 1 英文摘要 6 英文缩写 1 3 研究论文肠道微生态环境与儿童过敏性疾病的关系以及参芪健脾方对肠 粘膜屏障功能修复和免疫功能调整的研究 引言 16 第一部分肠道微生态学变化、CD4+T细胞亚群及相应转录因子在儿童 支气管哮喘病理机制中的调控作用 前言日lJ舌 ．．’．． ．1芍．18 材料与方法 1 9 结果 27 附图 30 附表 34 讨{念 36 小结 45 参考文献 46 第二部分肠粘膜屏障功能、CD4+T细胞亚群及相应转录因子在儿童过 敏性紫癜病理机制中的调控作用 前言月U舌 5r353 材料与方法 54 结果 ： ．．59 附图 62 附表 67 讨论 70 小结 78 参考文献 79 第三部分参芪健脾方对肠道菌群失调大鼠肠粘膜屏障功能修复及免疫功 能调整作用机制的实验研究 前言 前言日lJ吾 8686 材料与方法 86 结果 9 1 附图 95 附表 1 OO 讨论 1 07 小结 1 1 5 参考文献 11 6 结论 ．118 综述CD4+T细胞亚群及其免疫网络在支气管哮喘病理生理机制中调控作 用的新认识 120 致谢 1 3 8 个人简历 139 中文摘要肠道微生态环境与儿童过敏性疾病的关系以及参芪健脾方对肠 中文摘要 肠道微生态环境与儿童过敏性疾病的关系以及参芪健脾方对肠 粘膜屏障功能修复和免疫功能调整的研究 摘 要 在过去20年里，大量研究证实世界范围内过敏性疾病的发病率逐年 增加，其原因不十分清楚。“卫生假说为儿童在生命早期缺乏微生物的 暴露导致今后过敏性疾病的发生进行了解释，由于缺乏微生物刺激导致‘ Thl／Th2平衡紊乱和调节性T细胞功能低下。越来越多研究认为，儿童早 期缺乏微生物接触导致的过敏与今后发生哮喘和过敏性疾病的风险密切 相关。虽然过敏和哮喘具有遗传倾向性，但基因与环境的相互作用更能解 释发病机制。环境因素如感染、接触过敏原以及产前因素如母亲吸烟、孕 期营养、产妇精神压力、分娩方式和新生儿期应用抗生素等均会影响,bJD 今后过敏性疾病和支气管哮喘的发生。通过基因与环境的相互作用、表观 遗传学以及分子生物学深入研究，力图解开假定风险与过敏性疾病和支气 管哮喘发生的关联。有关哮喘和过敏性紫癜的流行病学资料、危险因素调 查以及病理机制有待进一步解释，了解这些机理对减少哮喘发生风险及寻 找切实有效的药物干预微生态生境，调整免疫功能对过敏性疾病的预防是 十分必要的。 第一部分：肠道微生态学变化、CD4+T细胞亚群及相应转录因子在儿童 支气管哮喘病理机制中的调控作用 目的：探讨肠道微生态环境变化以及免疫网络结构中CD4+T亚群及 相应细胞因子和上游转录因子在支气管哮喘病理机制中的相互调控作用。 方法：采用流式细胞术(Flow cytometry，FCM)对47例支气管哮喘 患儿和32例健康对照组儿童外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell，PBMC)测定CD3+CD8‘INF．矿IL．4。(Th1)、 CD3十CD8‘INF．铲IL．4十(Th2)、CD4十CD25+T细胞(Treg)和CD3十CD8‘IL．1 7+ (Thl 7)细胞百分比；采用酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)测定血浆中细胞因子INF．竹IL-4、TGF．p1 和IL．17水平；T-bet是调控Thl细胞分化、GATA3是调控Th2细胞分化、 Foxp3是调控调节性T细胞分化、ROR．M是Thl7分化的关键性转录因子， 中文摘要采用逆转录聚合酶链反应(Reverse 中文摘要 采用逆转录聚合酶链反应(Reverse transcription．polymerase chain reaction，RT．PCR)检测外周血单个核细胞内T．bet、GATA3、Foxp3和 ROR．M mRNA的表达；采用细菌16S rDNA方法测定粪便中双歧杆菌、 乳酸杆菌、大肠杆菌和肠球菌含量。 结果：支气管哮喘患儿在急性发作期时发生肠道菌群失调，表现在双 歧杆菌和乳酸杆菌为代表的厌氧菌数量下降，大肠杆菌和肠球菌为代表的 需氧菌数量变化不大，双歧杆菌／大肠杆菌(Bifidobacteria／escherichia coli， B／E)值下降。随着治疗和症状改善，恢复期时双歧杆菌数量上升较其他 细菌为快，但整体菌群结构并未扶正。对于免疫学指标的观察发现，支气 管哮喘患儿在急性发作期时外周血PBMC中Th2和Thl7细胞百分比以及 血浆中Th2和Thl7细胞因子IL．4和IL．1