强直刺激坐骨神经引起的持续性疼痛和胶质细胞的调制作用外周和脊髓机制分析神经生物学专业论文.docxVIP

中文摘要中文摘要 中文摘要 中文摘要 强直刺激坐骨神经引起的持续性疼痛和胶质细胞的 调制作用：外周和脊髓机制研究 强直电刺激大鼠坐骨神经可在脊髓背角引起场电位C反应和A反应的 长时程增强(10ng．term potentiation，LTP)和动物的疼痛敏化。本研究以强直刺 激坐骨神经诱导的大鼠慢性疼痛模型，从胶质细胞入手，主要探讨了强直刺激 坐骨神经诱导的大鼠慢性疼痛的外周和脊髓机制，并在此基础上，探索针药联 合镇痛的有效途径。 第一部分外周神经损伤和胶质细胞激活参与强直刺激坐骨神经诱导的大鼠 慢性痛 既往研究证实，强直电刺激大鼠坐骨神经、皮肤自然伤害性刺激或神经损 伤，均可在脊髓背角引起场电位C反应和A反应的长时程增强(10ng．term potentiation，LTP)。脊髓LTP的形成反映了痛觉信息传递的中枢敏化。已有研 究证明，引起脊髓LTP的强直电刺激能引起动物的疼痛敏化，包括触诱发痛 和热痛敏，但机制并不完全明确。以往的研究主要集中于脊髓水平，而对其外 周机制则关注甚少。 近年来的研究证明，外周和脊髓的胶质细胞在病理性疼痛的发生发展中发 挥重要作用。炎性痛和神经病理痛情况下均有胶质细胞的激活，而干预胶质细 胞的功能可减轻病理性疼痛。 本研究采用伤害性机械或热刺激的痛行为学测试方法、免疫荧光组织化学 方法、免疫荧光共标以及组织学染色和电镜技术，探讨强直刺激坐骨神经诱导 痛行为的外周机制以及外周和脊髓胶质细胞的作用。主要结果如下： 1．强直刺激坐骨神经可诱导大鼠双侧触诱发痛和术侧热痛敏，分别应用yon Frey机械刺激缩腿反射和辐射热刺激缩腿反射测定。术侧触诱发痛和热痛 敏可持续35天以上，并且疼痛在3周内最明显，以后逐渐缓解；而对侧 触诱发痛仅持续2周左右。 2．免疫组织化学结果表明，强直刺激坐骨神经可诱导神经损伤标记物一一转 录激活因子3(activating transcription factor 3，ATF3)在大鼠背根神经节 (dorsal root ganglion，DRG)感觉神经元和脊髓腹角运动神经元中表达，而 V 中文摘要在脊髓背角没有检测到ATF3的表达。DRG中ATF3的表达从强直刺激 中文摘要 在脊髓背角没有检测到ATF3的表达。DRG中ATF3的表达从强直刺激 后12小时开始，第l到14天达到高峰，第35天几乎消失；同时，Fast Blue染色和电镜观察结果显示，强直刺激后坐骨神经纤维出现变性，坐骨 神经刺激部位以及远端的Schwann细胞增殖，排列紊乱。这些结果均提示 强直电刺激导致神经损伤。 3．根据ATF3与神经微丝蛋白200(Neurofilament 200，NF200；A类DRG 大细胞的标记物)、异凝集素B4(Griffonia simplicifolia isolectin B4，IB4； 非肽能C类神经元标记物)和降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide，CGRP；肽能C类神经元标记物)的共标实验，这三类物质均与 ATF3存在共标，提示这三类DRG神经元均有不同程度的损伤。 4．强直刺激坐骨神经引起DRG小直径C类神经元的比例发生变化，IB4 阳性的C类非肽能神经元在强直刺激后第4、7与14天显著减少， CGRP阳性的C类肽能神经元在强直刺激后后第7天和第14天显著 减少，而大直径A类神经元强直刺激前后改变不明显。 5．强直刺激坐骨神经可诱导DRG卫星胶质细胞(satellite glial cells，SGCs) 的胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)表达显著上调。 GFAP在受损和未受损的神经元周围均有表达。此外，ATP敏感的配体门 控离子通道受体一一P2X7受体，在强直刺激坐骨神经后表达也发生上 调，且与GFAP部分共标。 6．强直刺激坐骨神经引起脊髓小胶质细胞和星形胶质细胞的激活。 综上所述，本研究表明，强直刺激坐骨神经可引起外周神经损伤，从而导 致DRG神经元和卫星胶质细胞以及P2X7的改变，进而促进脊髓胶质细胞 的激活。本研究首次揭示了强直刺激坐骨神经引起脊髓LTP和慢性痛的外周 可能机制。 关键词：强直刺激坐骨神经；疼痛；脊髓LTP；神经损伤；卫星胶质细胞； 转录激活因子3；P2X7受体：小胶质细胞；星形胶质细胞 VI 中文摘要第二部分丙戊茶碱抑制脊髓胶质细胞增强电针镇痛 中文摘要 第二部分丙戊茶碱抑制脊髓胶质细胞增强电针镇痛 既往研究表明，胶质细胞在疼痛发生发展中发挥重要作用，干扰脊髓胶质 细胞的功能可以加强电针对关节炎大鼠的镇痛作用。丙戊茶碱(propentofylline) 作为一种神经保护性的胶质细胞调节剂，已被临床上用于治疗老年痴呆症和血 管型痴呆等疾