IRM.2小鼠全长cDNA文库的构建及鉴定.PDFVIP

·274· 基础研究· IRM．2小鼠全长cDNA文库的构建及鉴定 王芹 李进 宋力 刘强 岳井银穆传杰 唐卫生 樊飞跃 【摘要】 目的分离和鉴定IRM-2小鼠辐射抗性相关基因。方法采用SMART技术构建 IRM-2小鼠全长eDNA文库，提取雄性1RM-2小鼠脾脏总RNA。以此为模板，通过逆转录酶 PowerScript反转录合成第1链cDNA，通过长距离PCR合成并扩增双链eDNA。该扩增产物经纯化、 SfiI酶切、去除小于500 I消化过的PDNR—LIB质粒载体中，用电转 bp片段后，将cDNA连接到sfi 化法将重组质粒转化到大肠杆菌DH5a，得到IRM-2小鼠cDNA原始文库并用PCR法对文库的质量 进行鉴定。随机从eDNA文库挑选130个阳性克隆进行测序，与GenBank基囡库进行同源性比较。 结果构建的cDNA文库的容量为2．25×106个克隆，重组率达95％，平均插入片段长度约1．2kb， 全长基因比例为55％。从eDNA文库挑选的阳性克隆中有2l条EST序列与小鼠已知基因不同源， cDNA文库，21条EST提示IRM-2小鼠体内可能存在辐射抗性相关基因，为进一步分离和鉴定辐射 抗性相关基因奠定了基础。 【关键词】 IRM-2小鼠；cDNA文库；SMART技术 ConstructionandcharacterizationofcDNA forIRM．2mice矸MⅣG library Qin。LIJin，SONGLi， LIU Qiang，YUEJing-yin，MuChuan伽，烈ⅣG％i—sheng，FANFei-yue．TianjinKeyLaboratoryof MolecularNuclear Radiation MedicalScienee$and Medicine。Instituteof Medicine．傩ineseAcademyof UnionMedical 300192．China Peking College．T讯njin author：FAN CorrespondingFet·yue，Email：faithyfan@yahoo．eom Toscreenandisolatetheradioresistancerelated ofIRM-2mice． 【Abstract】objective genes MethodscDNA ofIRM．2micewasconstructedSMART RNAwas library by technique．Totalisolated from ofIRM一2malemice．Thefirst．strandcDNAwas reverse spleens synthesizedbyusingPowerSeript double．strandcDNAwas and PCR．ThePCR transcriptase．and synthesizedamplifiedbylong products were withrestrictionSfil．Theds—CDNA lessthan500 purified，digested enzyme fragment bpwas and was fractionated totheSfi vector．Themixturetransformediuto ligated I-digestedpDNR．LIB Iigation E．coilDH5ct transformati