洛旱2号小麦中4个干旱诱导基因的克隆和表达作物栽培学与耕作学专业论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 致 致 谢 本文是在导师尹钧教授的悉心指导下完成的，恩师渊博的科研学识、严谨的学术 作风、执着的科研激情、勤奋的工作精神使我受益匪浅，终生难忘。感谢李永春老师 在实验过程中对我的关心和帮助，在实验设计、研究方法和实验的具体实施，直到论 文的修改和完成中投入了大量的心血。此时，内心充满感激之情却无从表达，谨向恩 师表示最诚挚的感谢和祝福。 本研究是在国家小麦工程技术研究中心完成的，在试验过程中，得到了孟凡荣、 任江萍、牛洪斌、袁秀云、李巧云、周苏玫、宋家永等老师的热情帮助和指导。国家 小麦工程技术研究中心郭天财教授、朱云集研究员、李金才教授、王晨阳研究员、王 化岑主任和李磊老师都在实验上给予我关心和帮助，在此一并对他们表示衷心的谢 意。同时也非常感谢农学院李潮海院长，研究生处谭金芳处长、李爱萍副处长和其他 老师在学习和生活上的帮助。 另外，在学习、实验和生活中得到陈焕丽、王振云等师姐、师兄，邓德芝、赵安 民、何丽、岳彩风、苗建丽、祝小捷、郅胜军、刘胜波、贾宏方等同届同学，王潇、 刘吴英、司志飞、郭建军、陈小霞、阎延涛、景晓东、陈雷、张问等师弟、师妹的关 心和帮助，实习生王碧秋、程鸿恩、李洋、郜响应等也付出了辛勤劳动，在此深表谢 意，三年的友好相处使我度过了美好的求学生涯。祝你们好事连连、心情快乐。 特别感谢家人对我的养育之恩，使我安心学习、生活，得以顺利完成学位论文， 他们的理解和支持是我不断进步的动力之源。 最后，再次向三年来关心、支持和帮助过我的各位老师同学及亲友表示最诚挚的 感谢! 王静英 2008年6月于郑州 河南农业大学2005 河南农业大学2005缀硕士学位论文 摘 要 本文在分析干旱胁迫条件下小麦品种洛旱2号根系基因表达谱的基础上，逶过R仰CR技术克隆 了4个干旱胁迫反应相关基因，分析了克隆基因在干旱、高盐胁迫和ABA处理条件下的表达特性； 构建了其中一个基因TaLEA4的正义释反义植物表达载体，并通过基因枪法、花粉管通道法释农杆 菌介导法进行了小麦和水稻的遗传转化，获得了缀PCR鉴定星阳性的转基因植株。主要结论为： 1．利髑RT-PCR方法克鍪?小麦干拳胁逵反应糖关基因4个：克隆基因TaLF_．e,t4 I憨cDNA片段 为764bp，编码区为510 bp，5’，非编码区有94bp，3’．非编码区有160 bp，推测编码蛋白的分子量为 17。53 kD，巍169个氨基酸组成，进一步研究发现克隆基因TaLEA4在中豳奏基因组中包含一个100bp 的内含子。TaRABl2基因eDNA片段长度为i013bp，其中编码1夏696bp，推测编码蛋白由231个氨 基酸组成，分子量为23．14 kD；TaRAB5瑾因的eDNA片段长度为464bp，编码区为363bp，推测可 编码120个氨基酸的多肤；TaK4891灌因的eDNA片段为950bp，其中编码区为549却，可编码182 个氨基酸的多肽，进一步分析发现该基因为受水分胁迫调控的膜蛋白基因。 2．分橱了克隆基因在于晕帮离盐(NaCI)胁遍及ABA缝瑾条件下的表达特性。结果表嗳，在 小麦幼苗根系中，在PEG6000胁迫诱导前期，TaLEA4基因的表达量逐渐上升，24h达到最强，48h 时迅速回落；两在小麦幼苗的汁片中，该基透麴在水分胁追0。5h的表达量较强，其它时蠲点的表达 水平都较低；在ABA处理胁迫条件下，该基因也表现出羞异表达的特性。PEG胁迫条件下，小麦 洛旱2号叶片中TaRAB56基因的表达呈现如逐渐增强后减弱的趋势，根系中TaRAB56基因在处理6h 时有稍强予对照的表达；中国春叶片和根系中勋删掰6基因在胁追不网时期的表达量与对照相比有 较大差异。NaCI处理条件下，该基因在小麦洛早2号中仅在0．5h时有稍强于对照的表达，而在中国 春时片帮搬系孛该基因表达趋势不明显；在ABA胁追过程中，TaRAB91灌因在小麦幼菌时片中出 现了差异表达；但在NaCI胁迫过程中，该基因在根系中的表达量高于在叶片中的表达量。 3。梅建了TaZEA4基因的照义和反义棱物表达的载体，并通过基魏枪、花粉管通道弱农杆菌会 导法分别进行了小麦和水稻的遗传转化研究。转基因植株的PCR检测结果表明：基因枪法获得转 TaLEA4正义基因的转基因小麦阳性植株2株，转TaLEA4反义基因的转基因小麦阳性檀株6株；花粉 管通道法获得转反义TaLEA4基因小麦植株223株(其中以郑麦9023为受体的185株，以豫麦34为受 体的38株)，转正义TaLEA4基因小麦植株26株(其中以郑麦9023为受体的5株，以豫麦34为受体的 2l株)；农杆菌介导法获得转基因水稻植株20株，其中转正义和反义TaLEA4基因的植株分别为毒 株和16株。 关键词：小麦；水分胁迫；基因克