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Company Logo 液相色谱技术简介 液相色谱的结构与原理 Company Logo 液相色谱技术简介 液相色谱的结构 高压输液系统 分离系统 检测系统 进样系统 Company Logo 液相色谱技术简介 液相色谱的分离系统 Company Logo 液相色谱技术简介 液相色谱的基本概念 固定相：固定相是色谱的一个基质。它可以是固体物质（如吸附剂，凝胶，离子交换剂等），也可以是液体物质（如固定在硅胶或纤维素上的溶液），这些基质能与待分离的化合物进行可逆的吸附，溶解，交换等作用。 流动相：在色谱过程中，推动固定相上待分离的物质朝着一个方向移动的液体、气体等，都称为流动相。柱色谱中一般称为洗脱剂，薄层色谱时称为展层剂。 Company Logo 分配系数 可由Langmuir方程得出 Kd---分配系数 q、c---溶质在固相和液相中的浓度 Company Logo 保留时间（tR）和保留体积（VR） 反应样品在柱子中的保留或阻滞能力，是色谱过程的基本热力学参数之一。 Company Logo 分离度:又称分辨率，用来表示两种洗脱曲线相邻的溶质相互分离的程度。 两个相邻洗脱峰之间的距离与两个峰宽的代数平均值. Company Logo 理论板，理论板当量高度（HETP），理论塔板数（N）、 反应不同时刻溶质在色谱柱中的分布以及分离度与柱高之间的关系。 理论板：将溶质达到一次分配平衡的色谱柱段。 理论板当量高度：该段色谱柱的高度。 Company Logo 理论板数的计算方法 N---理论塔板数 tR---保留时间 W1/2---半峰宽 Wb---峰底宽度 理论塔板高度： L---柱长 Company Logo 液相色谱技术简介 液相色谱的检测系统 介绍 Company Logo 种质中心Waters HPLC仪器全图 由图可以看出，HPLC仪器排出了大量的有毒废液，而这些实验室的废液是直接经下水道排到环境中去的，造成大量污染 Company Logo Waters HPLC仪器分离检测单元图 由图可以看出HPLC仪器需要大量的有毒流动相 Company Logo Agilent HPLC色谱仪器 Agilent HPLC仪器使用的废液瓶，这些废液并没有专门的处理方法 Company Logo Waters HPLC仪器内部结构 Waters仪器内部结构，右边内部是真空脱气机，外边是比例阀，右边是泵和单向阀，管路众多，结构复杂 Company Logo Waters仪器的分离通道 Waters仪器的样品分离通道，上面是色谱柱，下面是一个小的预柱 Company Logo 开尔文探针显微镜描述单个分子里的“电荷分布”图片 Company Logo 分离与浓集 固相萃取SPE 是目前使用相当广泛的一种萃取方法，惜乎价格较贵 将不同填料作为固定相装入小柱，药物溶液通过小柱时，药物被吸附、分配、离子交换，或其它亲和力作用，使药物及内源性物质同时被保留在固定相上，再选用适当溶剂洗脱药物的方法 这方面，美国是老大 Company Logo 用有机溶剂(甲醇)冲洗——洗净 用水冲洗——活化 上样 用水或缓冲液冲洗，洗去内源性物质 有机溶剂洗脱药物 收集洗脱液······ 固相萃取步骤 Company Logo 方法好价格贵 Company Logo ①固相选择 样品1ml 1ml规格固相 1~25ml 3ml规格固相 ②固相处理 反相C18 固定相的6~10倍体积甲醇洗柱，使溶剂化 6~10倍水缓冲服液冲洗达分离状态 ③上样 ④分离 用适当的弱溶剂洗涤 洗去杂质，通N2干燥固相 ⑤洗脱待测物 改变pH或极性 固相萃取具体步骤 Company Logo （1）流速 流速快，按触不充分，样品流失 回收率低 柱处理 5~10ml·min-1 洗脱 0.2~1ml·min-1（〈300mg〉 2~5ml·min-1（300mg） （2）装样 过载 突破性试验 已知浓度样品液 ① 小体积上柱→洗脱回收百分率 ②加大体积→洗脱回收百分率 ③绘图 当回收率下降时为过载 固相萃取具体步骤 Company Logo 超滤分离法 是以多孔半透膜（超滤膜）作为分离介质的一种膜分离技术，选用不同的孔径的不对称膜，即可按照分子量大小进行分离 适合TDM血样分析 Therapeutic drug monitoring Company Logo 缀合物的水解 酶水