经味觉通路的纳米氧化锌和纳米二氧化钛颗粒的中枢神经毒性口腔临床医学专业论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 硕士学位论文 硕士学位论文 1)透射电子显微镜(TEM)观察表面形貌 使用TEM观察纳米氧化锌和纳米二氧化钛的形态和结构，计算纳米氧化锌 和纳米二氧化钛的平均粒径。 2)纳米材料化学成分的分析 采用X线光谱仪(EDS)对纳米氧化锌和纳米二氧化钛进行化学成分分析。 3)x射线衍射物相分析(xIm) 采用XRD设备分析纳米氧化锌和纳米二氧化钛的晶相，在室温下，采用Ni 过滤的Cu．Ka射线进行。 4)纳米材料的Zeta电位和团聚程度分析 分别将纳米氧化锌和纳米二氧化钛纳米材料分散于无菌水中，漩涡震荡1 min，配置成纳米氧化锌和纳米二氧化钛混悬液。使用Zeta电位测定仪测量 纳米颗粒悬液的Zeta电位和水合粒径。 2．动物模型的构建及神经和脑组织元素含量检测 1)配液 用天平分别称量1。5 g的纳米氧化锌和纳米二氧化钛粉末，分别倒入装有30 mL无菌水的100 mL血清瓶中，用标签纸在瓶盖上分别标记为“纳米氧化锌” 和“纳米二氧化钛”。使用漩涡混匀器大力混匀，溶液浓度为50 mg／mL。将 装有纳米氧化锌和纳米二氧化钛混悬液的血清瓶放入水浴锅进行加热，当水 浴锅温度达到85—100。C时，用天平分别称量0．3 g羟丙基甲基纤维素(HPMC) 按照1％的比例，分别加入到纳米氧化锌和纳米二氧化钛血清瓶中。 2)超声混匀 将配置好的混悬液放入超声机中，频率调至95％，温度调至40℃，超声90 min，反复多次超声。每次给药前将配置好的混悬液再次加热，用漩涡混匀 器大力混匀，瓶底无沉淀后，放入超声机中超声约30 min，直至药物均匀分 散，无沉积，无明显团聚现象即可。 31 动物的选择 从南方医科大学动物中心购买体重为120．150 g的成年雄性Wistar大鼠30 III 万方数据 摘要 摘要 只，随机分组，其中纳米氧化锌组、纳米二氧化钛组、对照组各10只，要 求大鼠身体健康，活动度正常，毛发色泽及密度正常。 41麻药的配制 用天平称量1．0 g的戊巴比妥钠，放入装有100 mL生理盐水的血清瓶中，麻 药浓度为1％，振荡混匀，直至无肉眼可见的颗粒物。 51给药 腹腔注射1％戊巴比妥钠0．48 mL／100 g，麻醉起效时间3—10 min，持续时间 约2．3 h。用微型注射器根据动物体重在舌体上逐滴滴加5 mg／100 g纳米氧 化锌和纳米氧化钛混悬液，给药时间为第1、3、5、7 27、29 d，隔天给 药，第30 d麻醉断颈处死，提取组织检测。 6)神经组织和脑元素含量检测 提取大鼠的鼓索和舌咽神经、小脑、脑干、大脑皮层、海马，采用ICP．MS 检测纳米氧化锌组Zn元素的含量，纳米二氧化钛组大Ti元素的含量，对照 组Zn元素和Ti元素的含量。 71统计分析 采用SPSS 20．0软件对所得数据进行统计学分析，测定结果均以x±S表示， 组间采用单因素方差分析(One Way ANOVA)，检验方差齐性，如果方差 齐则对样本均数进行两两比较的LSD检验；如果方差不齐则采用Dunnett’S T3检验进行两两比较，假设检验为双侧检验，检验水准a=0．05。 3．脑组织及神经组织透射电子显微镜的检测 分别提取纳米氧化锌组，纳米二氧化钛组和对照组大鼠的海马，大脑皮层和 神经组织(鼓索)，放入固定液中固定，然后取出包埋，切片，观察组织中 是否存在纳米颗粒，及组织的损伤情况。 结果 1．表征结果显示，纳米氧化锌和纳米二氧化钛颗粒纯度高，无杂质，粒径为 50 nnl，制备的纳米氧化锌和纳米二氧化钛混悬液分散均匀，无明显团聚或 沉淀。 IV 万方数据 硕士学位论文 硕士学位论文 2．采用ICP．MS检测纳米氧化锌组Zn元素含量，纳米二氧化钛组Ti元素含量， 与对照组的Zn元素和Ti元素分别进行比较，发现实验组神经组织和脑组织 (小脑，脑干，大脑皮层，海马)的Zn元素和Ti元素明显高于对照组，差 异具有统计学意义。 3．脑组织和神经组织的TEM结果显示，纳米氧化锌组和纳米二氧化钛组大脑 皮层均可见组织中有散在的纳米颗粒沉积，部分细胞及细胞器形态改变，如 线粒体肿胀、嵴断裂，内质网肿胀，胶质细胞出现核固缩，核固裂，神经元 凹陷，胞质空，板层松解，形成空泡，髓鞘轴浆萎缩，形成空泡，还可见自 噬体、溶酶体形成。对照组未见明显的纳米颗粒沉积，细胞及细胞器形态良 好。 第二章纳米颗粒通过味觉神经通路入脑的神经毒性 材料与方法 1．纳米颗粒对脑组织的氧化应激损伤 1)将冰冻的样本取出，分别提取纳米氧化锌，纳米二氧化钛，对照组的脑组织 0．2 g，生理盐水稀释，尽可能保证样品在4。C环境中，使用组织匀浆机制备 组织匀浆(1：9 w／v)，约3．5次，每次间隔30．60 S，共约10 min，离心，转 速2500 r／m